黄鳝atrogin-1蛋白表达及细胞定位研究

发布时间：2021-10-15 14:15

　　为提高黄鳝养殖效率以及肌肉的质量,进一步发掘黄鳝肌肉发育相关基因,以atrogin-1为研究对象,构建了3种原核表达载体:pCold-TF-atrogin-1、pET28a （+）-atrogin-1及pGEX6P-1-atrogin-1。将构建的重组表达载体转入Transetta（DE3）感受态细胞,重组菌株经诱导表达后,仅pCold-TF-atrogin-1/Transetta（DE3）菌株表达出可溶性较高的重组蛋白。IPTG诱导试验结果表明,诱导剂浓度对蛋白质表达可溶性及含量几乎没有影响,诱导时间在20 h最佳。可溶性部分经Ni-NTA柱亲和层析纯化以及SDS-PAGE（10%聚丙烯酰胺）电泳,证实获得了重组蛋白。构建真核表达载体pEGFP-N1-atrogin-1,转染293T细胞,结果表明,atrogin-1融合蛋白在细胞质及细胞核中均有表达,且在细胞核中表达量相对较高。 

【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(05)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 主要试剂
    1.3 RNA提取及 cDNA合成
    1.4 atrogin-1基因的克隆
    1.5 atrogin-1表达载体的构建与鉴定
    1.6 atrogin-1蛋白的诱导表达
    1.7 诱导条件对atrogin-1蛋白表达的影响
        1.7.1 atrogin-1蛋白可溶性表达载体的筛选
        1.7.2 诱导剂浓度对atrogin-1蛋白表达的影响
        1.7.3 诱导时间对atrogin-1蛋白表达的影响
    1.8 atrogin-1蛋白的分离纯化
    1.9 atrogin-1基因的转染及在细胞中的定位
2 结果与分析
    2.1 atrogin-1基因的克隆结果
    2.2 pCold-TF-atrogin-1重组质粒的酶切鉴定结果
    2.3 pCold-TF-atrogin-1重组质粒的表达产物分析
    2.4 诱导条件对atrogin-1蛋白表达的影响
        2.4.1 atrogin-1蛋白可溶表达载体的筛选
        2.4.2 诱导剂浓度对atrogin-1蛋白表达的影响
        2.4.3 诱导时间对atrogin-1蛋白表达的影响
    2.5 atrogin-1蛋白的分离纯化与浓度测定
    2.6 atrogin-1蛋白在293T细胞中的定位分析
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]黄鳝网箱养殖技术研究[J]. 黄梅燕.  农家参谋. 2019(12)
[2]Bradford定量法在蛋白质组学中应用的优化研究[J]. 崔为同,薛华儒,成洪达,张海滨,王清路.  生物技术进展. 2019(03)
[3]黄鳝工厂化网箱养殖新技术[J]. 杨正锋,姚永平.  科学种养. 2019(03)
[4]创伤弧菌FrsA蛋白的纯化及生化表征[J]. 鲍玲玲,李至敏,王小琴,汤亚兰,许文武,李志敏.  河南农业科学. 2018(11)
[5]黄鳝生态养殖技术及效益分析[J]. 刘晓宇.  畜禽业. 2018(06)
[6]桑树谷氨酸脱氢酶基因MaGDHs的克隆及表达分析[J]. 植爽,任艳红,唐星,徐凤翔,王传宏,赵爱春,王茜龄.  中国农业科学. 2018(04)
[7]pColdTMTF载体原核表达FocA可溶性蛋白的研究[J]. 曾发姣,舒燕,缪东,胡新旭,曾艳.  湖南农业科学. 2016(07)
[8]乌桕SsSAD基因的原核表达与纯化研究[J]. 周波,彭丹,张琳,谭晓风,刘选明.  西北植物学报. 2014(03)
[9]甘蓝型油菜BnCOP1基因的原核表达和纯化[J]. 彭丹,周波,谢敏敏,唐冬英,赵小英,刘选明.  生命科学研究. 2011(03)



本文编号：3438116