水产疫苗新型输送系统的建立

发布时间：2021-10-16 06:19

　　目的：利用TAT-PTD的跨膜转导能力,建立新型水产疫苗输送系统,提高水产疫苗的接种效率。方法：通过基因工程的手段构建并表达重组蛋白GFP-TAT,比较GFP-TAT和GFP在细胞水平的跨膜效率、鱼浸泡免疫效果,探究TAT在水产疫苗应用中的可能性。通过基因工程的方法构建重组载体pET28a（+）-OmpK 和 pET28a（+）-OmpK-TAT,并表达两种重组蛋白。分别用这两种蛋白作为疫苗浸泡免疫欧洲鳗鲡,比较血清中的抗体效价以及免疫后对副溶血弧菌攻击的保护效果。结果：（1）利用PCR的手段克隆GFP的全序列,将TAT序列接在GFP基因序列的碳端,通过基因克隆的手段构建了重组质粒pET28a（+）-GFP-TAT,表达重组蛋白GFP-TAT,经过镍柱纯化得到(GFP-TAT蛋白；（2）分别用GFP和GFP-TAT两种蛋白孵育细胞1h,可以发现,与GFP相比,GFP-TAT能够高效、稳定的转导进入细胞内；（3）分别用GFP和GFP-TAT两种蛋白作为抗原,通过注射,口服和浸泡三种方法免疫锦鲤,免疫三周后,测定血清中抗体效价。可以发现,同种抗原免疫后,均是注射组的效价最高,浸泡组次之,而... 

【文章来源】：福州大学福建省 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－２重组质粒的ＰＣＲ验证和双酶切验证??

图２－４重组蛋Ａ的表达及包涵体验证??Ａ?１：空载体；２；重姐质粒１；?３；重姐质粒２；?Ｍ；蛋白分子貴巧准??

图２－５重姐菌的巧光检测（１０〇ｘ）??Ａ：蓝色激发光下的空载体：Ｂ：蓝色激发光下的巧导后重组菌??

【参考文献】：
期刊论文
[1]副溶血弧菌的致病机制[J]. 马立芝,郭李平,邱业峰.  生物技术通讯. 2013(06)
[2]副溶血弧菌免疫原性蛋白的鉴定及克隆表达[J]. 田丽花,叶智鸧,温良优,潘建义,赵辅昆.  浙江理工大学学报. 2013(06)
[3]鱼用基因工程疫苗研究进展[J]. 田园园,叶星.  中国农业科技导报. 2012(05)
[4]PTD介导的蛋白转导技术及其在医学领域中的应用[J]. 叶南慧,林艳云,潘剑茹,刘树滔,饶平凡.  生物医学工程学杂志. 2011(02)
[5]我国水产疫苗的研究现状[J]. 黄辉,齐振雄,余露军,吴勤超.  湖南农业科学. 2010(21)
[6]带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化[J]. 何火聪,刘树滔,潘剑茹,傅蓉,陈菁,陈躬瑞.  福州大学学报(自然科学版). 2010(04)
[7]副溶血弧菌分子致病机制研究进展[J]. 杨芳,李秀娟,徐保红.  中华疾病控制杂志. 2010(06)
[8]TAT蛋白转导结构域的研究进展[J]. 岳立辉,郭娜,赵砚丽.  国际麻醉学与复苏杂志. 2009 (06)
[9]副溶血性弧菌致病因素检测[J]. 黄锐敏,刘楚云,俞慕华.  河南预防医学杂志. 2009(05)
[10]嗜水气单胞菌疫苗的研究现状[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福.  渔业致富指南. 2009(20)

硕士论文
[1]副溶血弧菌免疫原性蛋白的鉴定及其研究[D]. 田丽花.浙江理工大学 2013



本文编号：3439318