SVCV G蛋白与宿主蛋白14-3-3β/α-A相互作用的研究
发布时间：2021-10-22 11:32
鲤春病毒血症病毒（Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV）属于弹状病毒科鲤春病毒属,是一种严重危害鲤养殖安全的传染性病原,感染鱼后能引起典型的鲤春病毒血症（Spring Viraemia of Carp,SVC）。该病在欧洲、亚洲和北美洲的鲤养殖区是较为常见的流行性疾病,虽然该疾病在我国还未检测到大规模暴发,但作为鲤养殖大国,该病对我国的鲤养殖产业构成潜在的巨大威胁。SVCV感染能引起鱼体体表出血、腹水和泄殖孔发炎等症状,严重者导至死亡。目前,SVCV的致病机理和入侵机制尚不清楚。SVCV结构蛋白糖蛋白（Glycoprotein,G）位于病毒囊膜上,在病毒入侵细胞时的内吞过程中发挥作用,该蛋白可以决定病毒的血清型。研究表明,SVCV蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒的免疫逃逸和复制产生重要影响。因此,研究SVCV G蛋白与宿主蛋白的相互作用对揭示该病毒的入侵与致病机理、抗病毒药物和预防疫苗的开发具有重要的科学意义。首先,利用串联亲和纯化（Tandem Affinity Purification,TAP）与质谱分析相结合的方法,在FHM细胞中筛选出可能与SVCV...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
多种蛋白与蛋白相互作用分析技术的应用范围(Syafrizayantietal2014)
1.5.1.2 酵母双杂交系统Y2H 是一种灵敏的体内 PPIs 的基因检测方法，基于重组的功能性转录因子能启动酵母细胞核内的指示基因转录(Fieldsetal1989)。Y2H 最初是在 20 世纪 80 年代中期使用酵母 GAL4 转录因子引入的。为了分析，使用两种表达质粒并将其转化到酵母菌株中，该酵母菌株在 GAL4 应答元件的控制下携带 lacZ 报道基因。一个质粒产生具有 GAL4 结合结构域的融合基因，命名为诱饵；在另一个质粒中，蛋白质与 GAL4激活结构域融合，命名为猎物。可以通过 lacZ 基因产物 β-半乳糖苷酶的活性进行检测来证明诱饵和猎物之间的相互作用。使用两种质粒类型的文库可以检测到每种可能的相互作用。其他 Y2H 系统原理和上面相同，只是利用其他酵母菌株开发报告基图 1-3 亲和纯化示意图 (Syafrizayanti et al 2014)Fig. 1-3 The Scheme ofAffinity purification (Syafrizayanti et al 2014)
SVCV G 蛋白与宿主蛋白 14-3-3β/α-A 相互作用的研究诱饵系统(Caufield et al 2012)。此外，还建立了新的 Y2H 系统来研究膜 PPIs (Snideretal2013)。不幸的是，所有的 Y2H 系统都容易产生误报和漏报。有关假阳性率的估计高达 70%(Deaneetal 2002)。尽管如此，Y2H 与 MS 结合在一个亚基因组或全基因组水平上有效地揭开了蛋白质相互作用的细胞网络。Y2H 的高通量潜力也提供了获得相互作用组学功能信息的方法(Brückner et al 2009)。优势：高通量；样品消耗量低。缺点：假阳性或假阴性率高；对实验室设施有一定的要求。限制：仅适用于研究细胞核中发生的 PPIs；在酵母中翻译后修饰程度很大。
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53 and Bad: remote strangers become close friends[J]. Peng Jiang~1 Wenjing Du~1 Mian Wu ~1Hefei National Laboratory for Physical Sciences at Microscale and School of Life Sciences,University of Science and Technology of China,Anhui 230027,China. Cell Research. 2007(04)
[2]14-3-3 proteins—an update[J]. Paulette MHAWECH. Cell Research. 2005(04)
本文编号：3451015
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
多种蛋白与蛋白相互作用分析技术的应用范围(Syafrizayantietal2014)
1.5.1.2 酵母双杂交系统Y2H 是一种灵敏的体内 PPIs 的基因检测方法，基于重组的功能性转录因子能启动酵母细胞核内的指示基因转录(Fieldsetal1989)。Y2H 最初是在 20 世纪 80 年代中期使用酵母 GAL4 转录因子引入的。为了分析，使用两种表达质粒并将其转化到酵母菌株中，该酵母菌株在 GAL4 应答元件的控制下携带 lacZ 报道基因。一个质粒产生具有 GAL4 结合结构域的融合基因，命名为诱饵；在另一个质粒中，蛋白质与 GAL4激活结构域融合，命名为猎物。可以通过 lacZ 基因产物 β-半乳糖苷酶的活性进行检测来证明诱饵和猎物之间的相互作用。使用两种质粒类型的文库可以检测到每种可能的相互作用。其他 Y2H 系统原理和上面相同，只是利用其他酵母菌株开发报告基图 1-3 亲和纯化示意图 (Syafrizayanti et al 2014)Fig. 1-3 The Scheme ofAffinity purification (Syafrizayanti et al 2014)
SVCV G 蛋白与宿主蛋白 14-3-3β/α-A 相互作用的研究诱饵系统(Caufield et al 2012)。此外，还建立了新的 Y2H 系统来研究膜 PPIs (Snideretal2013)。不幸的是，所有的 Y2H 系统都容易产生误报和漏报。有关假阳性率的估计高达 70%(Deaneetal 2002)。尽管如此，Y2H 与 MS 结合在一个亚基因组或全基因组水平上有效地揭开了蛋白质相互作用的细胞网络。Y2H 的高通量潜力也提供了获得相互作用组学功能信息的方法(Brückner et al 2009)。优势：高通量；样品消耗量低。缺点：假阳性或假阴性率高；对实验室设施有一定的要求。限制：仅适用于研究细胞核中发生的 PPIs；在酵母中翻译后修饰程度很大。
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53 and Bad: remote strangers become close friends[J]. Peng Jiang~1 Wenjing Du~1 Mian Wu ~1Hefei National Laboratory for Physical Sciences at Microscale and School of Life Sciences,University of Science and Technology of China,Anhui 230027,China. Cell Research. 2007(04)
[2]14-3-3 proteins—an update[J]. Paulette MHAWECH. Cell Research. 2005(04)
本文编号：3451015
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