赤眼鳟鳍条细胞系的建立及应用研究

发布时间：2021-11-04 11:22

　　细胞培养技术已在生物中广泛应用。本研究基于赤眼鳟比草鱼更具有抗GCRV特性,为草鱼抗病新品种选育研究开辟新的鱼类细胞资源。本人开展了赤眼鳟鳍条细胞系的建立及初步应用研究,获得了以下结果：1.通过采用组织培养,启动了赤眼鳟鳍条细胞的原代培养。在恒温培养箱中培养7-8天左右后,在显微镜下观察,开始从组织块周围迁出细胞。原代培养14天左右后,组织块周围生长成晕,并且呈放射状。通过采用酶消化法,成功的进行了细胞的传代培养,将其命名为SCF,目前已经成功传代40多次,细胞呈成纤维样生长。2.将初始密度为2.0×105个/mL的细胞分别接种到MEN、L-15、M19、R-1640四种不同培养基中,发现赤眼鳟鳍条细胞在Leibovitz-15培养基条件下呈现最适合的生长状态；将初始密度为2.0×105个/mL的细胞接种到含有5%、10%、15%、20%血清浓度的L-15培养基中,发现赤眼鳟鳍条细胞25℃条件下在含有20%血清浓度的L-15中呈最适合生长。液氮保存经复苏后,有82.5%的细胞仍然保持活性；染色体分析结果显示,第25代赤眼鳟鳍条细胞染色体为48条,为正常的二倍体。为进一步研究此细胞来源于... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 细胞培养概况
    1.2 鱼类细胞系的应用
        1.2.1 鱼类病毒分离和鉴定
        1.2.2 鱼类细胞疫苗制备
        1.2.3 转基因技术
        1.2.4 基因的筛选与功能分析
        1.2.5 免疫机理研究
        1.2.6 生理特性研究
        1.2.7 细胞核移植
        1.2.8 环境毒物以及污染物的检测
        1.2.9 鱼类资源保护研究
    1.3 建立鱼类细胞系方法
        1.3.1 常用的消毒方法
        1.3.2 细胞培养常用的方法
    1.4 细胞的组织来源
    1.5 细胞的培养条件
        1.5.1 细胞培养用的培养基
        1.5.2 温度对细胞的作用
        1.5.3 清对细胞的作用
    1.6 本论文研究的目的与意义
第二章 赤眼鳟鳍条组织来源细胞系的建立
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料与方法
        2.1.2 实验结果
    2.2 讨论
    2.3 小结
第三章 赤眼鳟鳍条细胞的生物学特性
    3.1 实验材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 试剂与器皿
        3.1.3 实验仪器与设备
        3.1.4 实验方法
    3.2 实验结果
        3.2.1 赤眼鳟鳍条细胞最适合的培养基类型
        3.2.2 赤眼鳟鳍条细胞最适合血清浓度
        3.2.3 赤眼鳟鳍条细胞系染色体核型分析
        3.2.4 赤眼鳟鳍条细胞的18SrRNA序列比对分析
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 赤眼鳟鳍条细胞系的初步应用研究
    4.1 实验材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 试剂与器皿
        4.1.3 实验仪器与设备
        4.1.4 实验方法
    4.2 实验结果
        4.2.1 质粒pEGFP-N1转染赤眼鳟鳍条细胞
        4.2.2 病毒GCRV以及GISV病毒滴度的测定
    4.3 讨论
    4.4 小结
全文总结
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Establishment and characterization of a testicular Sertoli cell line from olive flounder Paralichthys olivaceus[J]. 彭丽敏,郑媛,尤锋,吴志昊,邹玉霞,张培军.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2016(05)
[2]Establishment and Characterization of a New Marine Fish Cell Line from Ovary of Barfin Flounder（Verasper moseri）[J]. XU Xiaohui,FAN Tingjun,JIANG Guojian,YANG Xiuxia.  Journal of Ocean University of China. 2015(06)
[3]不同倍性泥鳅鳍细胞系的建立及生物学特性分析[J]. 李霞,马辰,秦艳杰,李雅娟,吴迪,白丽雯,刘博.  水生生物学报. 2014(01)
[4]鱼类细胞系在病毒学研究中的应用进展[J]. 周广舟,景红娟.  生物技术通报. 2011(03)
[5]半滑舌鳎肝脏细胞系的建立与鉴定[J]. 任国诚,陈松林,沙珍霞.  高技术通讯. 2008(06)
[6]施氏鲟不同组织来源细胞离体培养的初步研究[J]. 孟彦,张燕,张林,肖汉兵,李罗新,杨焱清,曾令兵.  细胞生物学杂志. 2007(05)
[7]漠斑牙鲆胚胎细胞系的建立与鉴定[J]. 任国诚,陈松林,沙珍霞.  中国水产科学. 2007(04)
[8]赤眼鳟繁殖生物学研究[J]. 杨明生,陈金安,黄孝湘,李建华.  淡水渔业. 2005(03)
[9]胚胎干细胞生物学特性[J]. 杨玉艾,华进联,马勇江,窦忠英.  中国比较医学杂志. 2004(03)
[10]动物血清在细胞培养中的重要性及其质量控制标准[J]. 马忠仁,冯玉萍,李倬,乔自林,侯兰新,李明生,冯若飞.  西北民族大学学报(自然科学版). 2003(03)

博士论文
[1]团头鲂三种细胞系的建立、鉴定及其初步应用[D]. 祝东梅.华中农业大学 2013

硕士论文
[1]南方鲇（Silurus meridionalis Chen）性腺体细胞系的建立、鉴定及应用[D]. 齐文闯.西南大学 2014



本文编号：3475625