凡纳滨对虾NOS及相关因子的研究
发布时间：2021-11-04 07:48
环境温度和病害是影响凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）健康养殖的重要因素。本研究通过生物化学方法研究了温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺氧代谢及能量代谢的影响;利用基因干扰技术（RNAi）初步研究了干扰NOS对凡纳滨对虾血细胞和肝胰腺免疫功能的影响。利用RACE-PCR技术克隆了NOS下游关键调控因子鸟苷酸环化酶（GCIII）基因的全长cDNA序列,并研究了其在对虾不同组织中的表达谱及WSSV病毒粒子刺激后,对虾肝胰腺、神经组织和血细胞中GCIII基因在转录水平上的表达变化,同时利用生物化学方法分析了免疫刺激后肝胰腺NOS活力,NO及环鸟苷酸（cGMP）含量的变化;利用大肠杆菌表达系统,在前期获得NOS全长cDNA序列的基础上,获得了其中的NO合成结构域重组蛋白;成功构建了对虾T7噬菌体展示文库。研究结果如下:（1）通过研究低温和高温对肝胰腺氧代谢和能量代谢的影响,发现低温及高温胁迫均会引起肝胰腺内O2-.含量及相应抗氧化酶活力增加,但是不同类型的抗氧化酶可能扮演不同角色;高温胁迫会导致NOS活力和NO含量显著增加;而低温及高温胁...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
凡纳滨对虾外部特征图
图 2-1 不同温度对凡纳滨对虾肝胰腺 O2-.含量（a），SOD 活力（b），CAT 活力（c）和 GSH 含量（d）变化的影响（n=3）“*”表示实验组数据与对照组数据具有显著性差异（P < 0.05），下同2.2.2 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺 NOS 活力及 NO 含量的影响温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺组织中 NOS 活力的影响如图 2-2（a）所示。15℃胁迫 6h， NOS 活力与对照组无显著差异，但是水温回复至对照水平 24 h 后，NOS 活力增加，达到对照组的 1.60 倍（P < 0.05）；19℃胁迫后 6 h，NOS 活力降低，仅为对照组的 57%，但是随着温度恢复 NOS 活力也恢复；31℃高温胁迫引起 NOS 活力下降，胁迫 6 h 后其活力为对照组的 76%，但是随着温度恢复，NOS 活力显著上升，24 h 时达到对照组的 1.74倍（P < 0.05）；35℃胁迫导致 NOS 活力在 6 h 时增加，为对照组的 1.22 倍，并且在温度恢复 24 h 后，NOS 活力为对照组的 2.59 倍（P < 0.05）。温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺组织中 NO 含量的影响如图 2-2（b）所示，15 与 19℃低温胁迫 6 h 时，实验组 NO 含量与对照组相比无显著差异，当回复至对照温度 24 h 后，19℃胁迫实验组 NO 含量显著降低，仅为对照组的 20%（P < 0.05）；31 和 35℃胁迫 6 h
图 2-2 不同温度对凡纳滨对虾肝胰腺 NOS（a）活力和 NO（b）生成量的影响（n=3）2.2.3 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺 ATP 含量的影响温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺组织中 ATP 含量的影响如图 2-3 所示，15℃胁迫 6 h 后ATP 含量显著高于对照组，为对照组的 1.57 倍（P < 0.05），但是温度回复至对照水平 24 h后， ATP 含量回复至对照组水平；19℃胁迫 6 h 也会引起 ATP 含量上升，为对照组的 1. 40倍，但是随着温度的回复，ATP 含量也下降，回复至对照温度 24 h 后，ATP 含量仅为对照组的 60%（P < 0.05）；无论是胁迫过程中或者温度回复后，31℃的高温均未引起 ATP 含量的显著变化；35℃胁迫后 6 h，ATP 含量显著增加，达到对照组的 1.69 倍（P < 0.05），而温度回复至对照水平 24 h 后，ATP 含量也回复至对照组水平。
【参考文献】：
期刊论文
[1]盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆、原核表达及纯化[J]. 陶晓迎,柴晓杰,薛飞,李秀娟,丛玉婷. 中国农学通报. 2014(02)
[2]重组斑马鱼CD36蛋白的原核表达及纯化[J]. 魏书磊,刘振辉,黄巧艳. 生物技术通讯. 2013(03)
[3]红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化[J]. 黄瑜,张雪利,鲁义善,简纪常,吴灶和,黄浦江,周泽军. 广东海洋大学学报. 2013(01)
[4]家蚕中肠cDNA T7噬菌体展示文库的构建和免疫相关基因的淘选[J]. 胡翠美,王菲,宋亮,夏庆友. 蚕业科学. 2011(04)
[5]温度对凡纳滨对虾幼体生长、变态和存活率的影响[J]. 杨章武,卢小宁,郑雅友,李正良. 台湾海峡. 2011(01)
[6]利用噬菌体展示技术研究功能基因组和蛋白质-蛋白质相互作用——与酵母双杂交方法比较[J]. 张佳娣,石屹峰. 中国医药生物技术. 2010(03)
[7]寒流对凡纳滨对虾养殖的影响及防范措施探讨[J]. 李色东,何建国,张存善,刘丽燕,王亚平. 科学养鱼. 2010(01)
[8]噬菌体展示技术在蛋白质研究中的应用[J]. 李珣,任珍珍,钟国华. 生命的化学. 2009(04)
[9]温度对凡纳滨对虾血淋巴免疫指标的影响[J]. 李强,李华,姜传俊,王吉桥. 大连水产学院学报. 2008(02)
[10]氨氮胁迫前后凡纳滨对虾组织中抗氧化酶和脂质过氧化产物的分布[J]. 刘晓华,曹俊明,杨大伟,周萌,赵红霞,马力,蓝汉冰,谢从新,黄志刚. 水利渔业. 2007(06)
硕士论文
[1]环境温度对大蟾蜍中华亚种非特异性免疫、抗氧化功能及能量消耗特征的影响[D]. 庄建洲.浙江师范大学 2013
本文编号：3475313
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
凡纳滨对虾外部特征图
图 2-1 不同温度对凡纳滨对虾肝胰腺 O2-.含量（a），SOD 活力（b），CAT 活力（c）和 GSH 含量（d）变化的影响（n=3）“*”表示实验组数据与对照组数据具有显著性差异（P < 0.05），下同2.2.2 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺 NOS 活力及 NO 含量的影响温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺组织中 NOS 活力的影响如图 2-2（a）所示。15℃胁迫 6h， NOS 活力与对照组无显著差异，但是水温回复至对照水平 24 h 后，NOS 活力增加，达到对照组的 1.60 倍（P < 0.05）；19℃胁迫后 6 h，NOS 活力降低，仅为对照组的 57%，但是随着温度恢复 NOS 活力也恢复；31℃高温胁迫引起 NOS 活力下降，胁迫 6 h 后其活力为对照组的 76%，但是随着温度恢复，NOS 活力显著上升，24 h 时达到对照组的 1.74倍（P < 0.05）；35℃胁迫导致 NOS 活力在 6 h 时增加，为对照组的 1.22 倍，并且在温度恢复 24 h 后，NOS 活力为对照组的 2.59 倍（P < 0.05）。温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺组织中 NO 含量的影响如图 2-2（b）所示，15 与 19℃低温胁迫 6 h 时，实验组 NO 含量与对照组相比无显著差异，当回复至对照温度 24 h 后，19℃胁迫实验组 NO 含量显著降低，仅为对照组的 20%（P < 0.05）；31 和 35℃胁迫 6 h
图 2-2 不同温度对凡纳滨对虾肝胰腺 NOS（a）活力和 NO（b）生成量的影响（n=3）2.2.3 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺 ATP 含量的影响温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺组织中 ATP 含量的影响如图 2-3 所示，15℃胁迫 6 h 后ATP 含量显著高于对照组，为对照组的 1.57 倍（P < 0.05），但是温度回复至对照水平 24 h后， ATP 含量回复至对照组水平；19℃胁迫 6 h 也会引起 ATP 含量上升，为对照组的 1. 40倍，但是随着温度的回复，ATP 含量也下降，回复至对照温度 24 h 后，ATP 含量仅为对照组的 60%（P < 0.05）；无论是胁迫过程中或者温度回复后，31℃的高温均未引起 ATP 含量的显著变化；35℃胁迫后 6 h，ATP 含量显著增加，达到对照组的 1.69 倍（P < 0.05），而温度回复至对照水平 24 h 后，ATP 含量也回复至对照组水平。
【参考文献】：
期刊论文
[1]盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆、原核表达及纯化[J]. 陶晓迎,柴晓杰,薛飞,李秀娟,丛玉婷. 中国农学通报. 2014(02)
[2]重组斑马鱼CD36蛋白的原核表达及纯化[J]. 魏书磊,刘振辉,黄巧艳. 生物技术通讯. 2013(03)
[3]红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化[J]. 黄瑜,张雪利,鲁义善,简纪常,吴灶和,黄浦江,周泽军. 广东海洋大学学报. 2013(01)
[4]家蚕中肠cDNA T7噬菌体展示文库的构建和免疫相关基因的淘选[J]. 胡翠美,王菲,宋亮,夏庆友. 蚕业科学. 2011(04)
[5]温度对凡纳滨对虾幼体生长、变态和存活率的影响[J]. 杨章武,卢小宁,郑雅友,李正良. 台湾海峡. 2011(01)
[6]利用噬菌体展示技术研究功能基因组和蛋白质-蛋白质相互作用——与酵母双杂交方法比较[J]. 张佳娣,石屹峰. 中国医药生物技术. 2010(03)
[7]寒流对凡纳滨对虾养殖的影响及防范措施探讨[J]. 李色东,何建国,张存善,刘丽燕,王亚平. 科学养鱼. 2010(01)
[8]噬菌体展示技术在蛋白质研究中的应用[J]. 李珣,任珍珍,钟国华. 生命的化学. 2009(04)
[9]温度对凡纳滨对虾血淋巴免疫指标的影响[J]. 李强,李华,姜传俊,王吉桥. 大连水产学院学报. 2008(02)
[10]氨氮胁迫前后凡纳滨对虾组织中抗氧化酶和脂质过氧化产物的分布[J]. 刘晓华,曹俊明,杨大伟,周萌,赵红霞,马力,蓝汉冰,谢从新,黄志刚. 水利渔业. 2007(06)
硕士论文
[1]环境温度对大蟾蜍中华亚种非特异性免疫、抗氧化功能及能量消耗特征的影响[D]. 庄建洲.浙江师范大学 2013
本文编号：3475313
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