Qrr1-5对溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶合成机制的研究
发布时间：2021-11-13 14:02
溶藻弧菌是海水养殖鱼类的重要病原菌,其主要毒力因子为胞外碱性丝氨酸蛋白酶（Alkaline serine protease,Asp）。s RNA是一类广泛存在于细菌体内的非编码小RNA分子,通过碱基互补配对作用对靶标基因进行转录后调控,参与细菌不同生理进程。前期工作在溶藻弧菌体内鉴定得到5个可影响其碱性丝氨酸蛋白酶合成的s RNA分子,即Qrr1-5。为了阐明Qrr1-5调控碱性丝氨酸蛋白酶合成的分子机制,本文通过HPA显色反应检测了Qrr1-5对Asp活性的影响,进一步利用Western Blot、Realtime PCR、翻译融合、EMSA等手段深入研究了Qrr1-5对溶藻弧菌Asp表达调控的内在分子作用机制。主要结果如下:（1）通过HPA定量分析的方法对溶藻弧菌不同菌株中Asp活性进行研究,结果发现Qrr1-5对Asp的活性均具有一定的抑制作用,其中Qrr1、Qrr3的结果最为显著。采用Asp多克隆抗体对不同菌株中Asp蛋白的表达量进行检测,实验结果表现Qrr1-5抑制Asp的表达,且Qrr1、Qrr3的表现最为明显,这与HPA所得结果一致。利用Lux R抗体分别检测了?qrr1...
【文章来源】：陕西科技大学陕西省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哈氏弧菌群体感应模型
图 1-2 霍乱弧菌群体感应模型Fig. 1-2 Quorum sensing model in Vibrio cholerae群体感应控制细菌的行为包括生物发光，生物被膜的形成和毒力因子[4 溶藻弧菌中非编码 sRNA，Qrr1-5 与哈氏弧菌和霍乱弧菌群体感应通路相，位于群体感应系统的中心，是本研究的重点[4 9 - 51 ] 4 分子伴侣蛋白 Hfq 及 sRNAHfq 属于 Sm-like（ LSm）蛋白家族，在古细菌中也有发现[5 2 ] Hfq 作为 sR分子伴侣蛋白，广泛存在于革兰氏阴性和阳性细菌中，具有较高的保守性稳定性，大小为 70~110 个氨基酸不等，通常形成六聚体结构 Hfq 最初现于在大肠杆菌中的，因其为 RNA 噬菌体 Qβ 在大肠杆菌体内复制所必需主因子而得名 (Host factor of the RNA bacteriophage Qβ, Hfq) Hfq 会主动变 RNAs 的二级结构，也可被动地作为一个平台，让 sRNA 和 mRNAs 发用[5 3 ] 此外，Hfq 与 sRNA 的结合可使其免受细胞核糖核酸酶，例如 RN降解作用[5 4 ] 在交错复杂的调控网络中，Hfq 是如何促使各种 RNA 分子
图 1-3 Hfq 作用模式示意图[53 ]Fig. 1-3 T he diagram of Hfq function mode[5 3 ] sRNA 伴侣蛋白亦可独立发挥作用，其主要的作A）sRNA-Hfq 复合物与靶标 mRNA 核糖体结合止靶标 mRNA 的翻译 （B）sRNA-Hfq 与 mRN出来，从而与核糖体结合，促进翻译的进行 （复合物招募 RNaseE 和 mRNA 都被降解 （ D）免受 RNaseE 的降解 （E）Hfq 促进聚腺嘌呤聚继而在 RNaseE 的作用下被降解 子伴侣蛋白，促进了 sRNA 分子与靶标 mRNA 细菌的各种重要生理活动 在许多致病菌中，例(Salmonella typhimurium) 脑膜炎奈瑟菌(Neisseri菌 (Burkholderia cepacia) 兔 热 弗 朗 西 斯 氏路致病性大肠杆菌(uropathogenic E. coli)，Hfq 相关基因的表达具有重要调控作用[5 6 - 61 ]
【参考文献】：
期刊论文
[1]创伤弧菌致病性及其毒力因子研究进展[J]. 王明义,胡成进. 中国微生态学杂志. 2017(12)
[2]黄金鲫源霍乱弧菌的分离鉴定及毒力检测[J]. 任燕,王庆,王英英,李莹莹,曾伟伟,高彩霞,石存斌. 中国预防兽医学报. 2017(11)
[3]气候变化与海洋弧菌疾病的关系[J]. 明红霞,樊景凤. 海洋环境科学. 2015(05)
[4]海产品中副溶血弧菌检测方法研究进展[J]. 纪懿芳,胡文忠,姜爱丽,冯可,董妍. 食品工业科技. 2015(05)
[5]创伤弧菌溶细胞素细胞毒性机制的研究进展[J]. 赵旭鸿,陆森泉. 微生物与感染. 2006(01)
[6]水产品中创伤弧菌的快速检测与分离[J]. 何闪闪,薛长湖,李兆杰,汪俊,杨文鸽. 中国食品学报. 2005(03)
[7]创伤弧菌致病机制的研究进展[J]. 李永涛,陆森泉. 国外医学(微生物学分册). 2003(02)
博士论文
[1]溶藻弧菌群体感应系统元件Hfq和LuxT的功能研究[D]. 刘欢.华东理工大学 2012
本文编号：3493150
【文章来源】：陕西科技大学陕西省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哈氏弧菌群体感应模型
图 1-2 霍乱弧菌群体感应模型Fig. 1-2 Quorum sensing model in Vibrio cholerae群体感应控制细菌的行为包括生物发光，生物被膜的形成和毒力因子[4 溶藻弧菌中非编码 sRNA，Qrr1-5 与哈氏弧菌和霍乱弧菌群体感应通路相，位于群体感应系统的中心，是本研究的重点[4 9 - 51 ] 4 分子伴侣蛋白 Hfq 及 sRNAHfq 属于 Sm-like（ LSm）蛋白家族，在古细菌中也有发现[5 2 ] Hfq 作为 sR分子伴侣蛋白，广泛存在于革兰氏阴性和阳性细菌中，具有较高的保守性稳定性，大小为 70~110 个氨基酸不等，通常形成六聚体结构 Hfq 最初现于在大肠杆菌中的，因其为 RNA 噬菌体 Qβ 在大肠杆菌体内复制所必需主因子而得名 (Host factor of the RNA bacteriophage Qβ, Hfq) Hfq 会主动变 RNAs 的二级结构，也可被动地作为一个平台，让 sRNA 和 mRNAs 发用[5 3 ] 此外，Hfq 与 sRNA 的结合可使其免受细胞核糖核酸酶，例如 RN降解作用[5 4 ] 在交错复杂的调控网络中，Hfq 是如何促使各种 RNA 分子
图 1-3 Hfq 作用模式示意图[53 ]Fig. 1-3 T he diagram of Hfq function mode[5 3 ] sRNA 伴侣蛋白亦可独立发挥作用，其主要的作A）sRNA-Hfq 复合物与靶标 mRNA 核糖体结合止靶标 mRNA 的翻译 （B）sRNA-Hfq 与 mRN出来，从而与核糖体结合，促进翻译的进行 （复合物招募 RNaseE 和 mRNA 都被降解 （ D）免受 RNaseE 的降解 （E）Hfq 促进聚腺嘌呤聚继而在 RNaseE 的作用下被降解 子伴侣蛋白，促进了 sRNA 分子与靶标 mRNA 细菌的各种重要生理活动 在许多致病菌中，例(Salmonella typhimurium) 脑膜炎奈瑟菌(Neisseri菌 (Burkholderia cepacia) 兔 热 弗 朗 西 斯 氏路致病性大肠杆菌(uropathogenic E. coli)，Hfq 相关基因的表达具有重要调控作用[5 6 - 61 ]
【参考文献】：
期刊论文
[1]创伤弧菌致病性及其毒力因子研究进展[J]. 王明义,胡成进. 中国微生态学杂志. 2017(12)
[2]黄金鲫源霍乱弧菌的分离鉴定及毒力检测[J]. 任燕,王庆,王英英,李莹莹,曾伟伟,高彩霞,石存斌. 中国预防兽医学报. 2017(11)
[3]气候变化与海洋弧菌疾病的关系[J]. 明红霞,樊景凤. 海洋环境科学. 2015(05)
[4]海产品中副溶血弧菌检测方法研究进展[J]. 纪懿芳,胡文忠,姜爱丽,冯可,董妍. 食品工业科技. 2015(05)
[5]创伤弧菌溶细胞素细胞毒性机制的研究进展[J]. 赵旭鸿,陆森泉. 微生物与感染. 2006(01)
[6]水产品中创伤弧菌的快速检测与分离[J]. 何闪闪,薛长湖,李兆杰,汪俊,杨文鸽. 中国食品学报. 2005(03)
[7]创伤弧菌致病机制的研究进展[J]. 李永涛,陆森泉. 国外医学(微生物学分册). 2003(02)
博士论文
[1]溶藻弧菌群体感应系统元件Hfq和LuxT的功能研究[D]. 刘欢.华东理工大学 2012
本文编号：3493150
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3493150.html
