马氏珠母贝壳基质蛋白基因的克隆和表达模式研究
发布时间：2021-11-13 19:28
马氏珠母贝是最重要的海水珍珠贝，然而至今还不能从分子水平彻底阐明珍珠的形成。珍珠的形成属于生物矿化过程（biomineralization），是由一系列基质蛋白指导CaCO3结晶的过程，但关于它们在分子水平上的作用机理，多个基质蛋白相互之间的关系，与其他物种相关蛋白之间的进化关系，表达水平的调控，目前的研究成果都无法给与充分的解释。本实验主要完成2方面的工作：（1）考察多种环境因子对马氏珠母贝一种重要基质蛋白基因表达模式的影响；（2）发现一种新的壳基质蛋白，并进一步预测和分析其结构和功能。我们拟通过开展这样的工作，为研究贝壳和珍珠的形成机理做出初步的研究。利用5’RACE技术，克隆出一种马氏珠母贝壳基质蛋白基因的cDNA全长，通过预测该蛋白质序列，发现其N端含有一段19个氨基酸组成的信号肽，含有典型的Gly-rich区和C端RKKKY保守序列，同源性分析表明，这是一个新发现的Shematrin家族成员，和Shematrin-2同属一个亚家族，故命名为Shematrin-2β。进一步的比对发现，Shematrin-2β和MSI7有着局部高度匹配的区域，推测二者在进化上有着特殊的关系。氨基...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Nacrein作用机理模式图
可能会赋予其与 Ca2+极强的结合能力。N 端和 C 端各一个 Cys 可能也意味着子内或者分子间的二硫键。N16[10]是经过 pH 呈弱碱性的 10%EDTA-4Na 脱钙处理后获得的水不溶性（WISM），分子量 16kDa，故因此而得名 N16。该家族首次发现 3 个成员 131，299 和 299 个氨基酸，信号肽均为 N 端的 23 个氨基酸。RT-PCR 结果显示外套膜背部区域（dorsal region）含量极高，而在边缘区域（edge region）含量明该蛋白可能参与珍珠层的形成。氨基酸组分分析显示，含量最高的为 Gsn 和 Cys，除此以外，芳香族氨基酸含量也很高，酸性氨基酸主要聚集在 4 级结构分析显示，该蛋白含有大量的 β 转角（β-turn），一定量的 β 折叠和旋（α-helix）。体外结晶模拟实验显示，游离状态下的 N16 能够抑制结晶过旦结合在 WISM 底质上，则能够诱导珍珠层所特有的文石晶体的结晶。从另，N16 并没有调节碳酸钙晶体多态性的作用。尽管 N16 能够结合 Ca2+，但其其他 Ca2+-binding 蛋白具有特征性的相关结构域，据推测有 3 种可能性：（区域可能参与与 Ca2+结合；（2）硫酸盐侧链的作用；（3）Asn-Gly（NG）用。
图 1.4 Prismalin-14 功能区示意图[1unctional domain mode发现的酸性最强的壳基质蛋白，有可Asp 所占比例高达 60.4%，其次为 Gl前对 Aspein 的作用尚不清楚，但其所的 Ca2+结合能力。有众多的成员，最初在马氏珠母贝中和黑蝶贝中均发现大量的 Shematrin- 的氨基酸组成和序列有着显著地 2 大 员 该 motif 有 着 一 定 的 差 异 ）Y 序列。虽然很多研究人员都认为该，该家族的很多成员也参与珍珠层的冲液抽提，HPLC 纯化而获得的一种要基质蛋白，不像其他基质蛋白通过抑核位点，通过与离子的相互作用以及对
【参考文献】：
期刊论文
[1]Construction of cDNA subtractive library from pearl oyster （Pinctada fucata Gould） with red color shell by SSH[J]. 管云雁,黄良民,何毛贤. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2011(03)
本文编号：3493582
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Nacrein作用机理模式图
可能会赋予其与 Ca2+极强的结合能力。N 端和 C 端各一个 Cys 可能也意味着子内或者分子间的二硫键。N16[10]是经过 pH 呈弱碱性的 10%EDTA-4Na 脱钙处理后获得的水不溶性（WISM），分子量 16kDa，故因此而得名 N16。该家族首次发现 3 个成员 131，299 和 299 个氨基酸，信号肽均为 N 端的 23 个氨基酸。RT-PCR 结果显示外套膜背部区域（dorsal region）含量极高，而在边缘区域（edge region）含量明该蛋白可能参与珍珠层的形成。氨基酸组分分析显示，含量最高的为 Gsn 和 Cys，除此以外，芳香族氨基酸含量也很高，酸性氨基酸主要聚集在 4 级结构分析显示，该蛋白含有大量的 β 转角（β-turn），一定量的 β 折叠和旋（α-helix）。体外结晶模拟实验显示，游离状态下的 N16 能够抑制结晶过旦结合在 WISM 底质上，则能够诱导珍珠层所特有的文石晶体的结晶。从另，N16 并没有调节碳酸钙晶体多态性的作用。尽管 N16 能够结合 Ca2+，但其其他 Ca2+-binding 蛋白具有特征性的相关结构域，据推测有 3 种可能性：（区域可能参与与 Ca2+结合；（2）硫酸盐侧链的作用；（3）Asn-Gly（NG）用。
图 1.4 Prismalin-14 功能区示意图[1unctional domain mode发现的酸性最强的壳基质蛋白，有可Asp 所占比例高达 60.4%，其次为 Gl前对 Aspein 的作用尚不清楚，但其所的 Ca2+结合能力。有众多的成员，最初在马氏珠母贝中和黑蝶贝中均发现大量的 Shematrin- 的氨基酸组成和序列有着显著地 2 大 员 该 motif 有 着 一 定 的 差 异 ）Y 序列。虽然很多研究人员都认为该，该家族的很多成员也参与珍珠层的冲液抽提，HPLC 纯化而获得的一种要基质蛋白，不像其他基质蛋白通过抑核位点，通过与离子的相互作用以及对
【参考文献】：
期刊论文
[1]Construction of cDNA subtractive library from pearl oyster （Pinctada fucata Gould） with red color shell by SSH[J]. 管云雁,黄良民,何毛贤. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2011(03)
本文编号：3493582
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