黄颡鱼转基因与基因敲除的技术研究
发布时间：2021-11-16 01:57
黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco Richardson）是中国的一种重要的养殖鱼类,但它体型较小、生长较慢,限制了黄颡鱼养殖产业的快速发展。为获得大规格且快速生长的黄颡鱼,本论文开展了黄颡鱼转基因和基因敲除的研究。首先,比较了精子载体法和显微注射法将转基因构件导入黄颡鱼受精卵的效率。其次,应用显微注射法将以黄颡鱼β-actin基因启动子驱动黄色荧光蛋白报告基因构件导入黄颡鱼受精卵,获得了转黄色荧光蛋白基因黄颡鱼1尾,证明黄颡鱼β-actin基因启动子可驱动报告基因表达。第三,通过将黄颡鱼β-actin基因启动子驱动的“全鱼”转生长激素基因构件导入黄颡鱼受精卵,获得转“全鱼”生长激素基因黄颡鱼1尾。最后,为制作不育系黄颡鱼,运用CRISPR-Cas9技术获得gnrh1与gnrh2基因单或双敲除的杂合子黄颡鱼51尾。以上结果成功地建立了黄颡鱼基因组改造的技术平台,为黄颡鱼的基因工程育种奠定了基础。1.比较了精子载体法和显微注射法将转基因构件导入黄颡鱼受精卵的效率。将含黄颡鱼1017 bp β-actin基因5’-起始密码子上游侧翼序列的近端启动子驱动的黄色荧光蛋白报告...
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２．１?１７５６?ｂｐ黄颡鱼ｐ－ａｃｔｉｎ基因片段示意图
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精卵数量约３０００枚。其中的一次共获得发育至受精后２４小时以上的胚胎６７０??枚，对受精后２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的胚胎在荧光显微镜下进行了观察，可观测到表??达荧光蛋白的胚胎共４５１枚，具全身广泛性表达的有７７枚，结果见图２．３。结果??表明显微注射法可以有效将Ｔｇ?转入黄颡鱼胚胎并有效表达。??以上结果显示，精子载体法虽然具有操作简单的优点，但是其转移效率太低，??在约８０００枚受精卵中均未见到黄色焚光蛋白的表达；而显微注射法获得表达荧??光蛋白的黄颡鱼胚胎共４５１枚，具全身广泛性表达黄颡鱼胚胎７７枚。由此可见，??显微注射技术可作为有效的转基因方法应用于黄颡鱼转基因制作。??２４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展[J]. 郑小梅,张晓立,于建东,郑平,孙际宾. 生物技术进展. 2015(01)
[2]转基因鱼的安全性及检测技术[J]. 李风铃,江艳华,姚琳,王联珠,翟毓秀. 食品安全质量检测学报. 2014(01)
[3]转基因鱼类生态安全的研究进展[J]. 吴晗,姜鹏,白俊杰. 中国农学通报. 2013(11)
[4]转基因鱼的研究进展与商业化前景[J]. 叶星,田园园,高风英. 遗传. 2011(05)
[5]Integration mechanisms of transgenes and population fitness of GH transgenic fish[J]. HU Wei & ZHU ZuoYan* State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China. Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[6]快速生长导致转“全鱼”生长激素基因鲤鱼临界游泳速度的降低[J]. 李德亮,傅萃长,胡炜,钟山,汪亚平,朱作言. 科学通报. 2007(08)
[7]转生长激素基因中华倒刺鲃的构建及其检测[J]. 丁洁,顾继锐,伍翠芳,李永文,张涛,吴江,谢显连,徐恒. 淡水渔业. 2006(03)
[8]黄颡鱼生长激素cDNA序列克隆及其序列分析[J]. 孙玉华,谢从新. 水利渔业. 2006(03)
[9]电脉冲作用将外源基因导入稀有鮈鲫精子的研究[J]. 钟家玉,茅卫锋,朱作言. 遗传学报. 2002(02)
[10]用精子载体法将MT-hGH基因导入泰山赤鳞鱼[J]. 翟玉梅,鹿培源,崔博文,王喆,时永香,杨晓梅,赵晶,岳永生. 海洋与湖沼. 2001(01)
本文编号：3497958
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２．１?１７５６?ｂｐ黄颡鱼ｐ－ａｃｔｉｎ基因片段示意图
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精卵数量约３０００枚。其中的一次共获得发育至受精后２４小时以上的胚胎６７０??枚，对受精后２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的胚胎在荧光显微镜下进行了观察，可观测到表??达荧光蛋白的胚胎共４５１枚，具全身广泛性表达的有７７枚，结果见图２．３。结果??表明显微注射法可以有效将Ｔｇ?转入黄颡鱼胚胎并有效表达。??以上结果显示，精子载体法虽然具有操作简单的优点，但是其转移效率太低，??在约８０００枚受精卵中均未见到黄色焚光蛋白的表达；而显微注射法获得表达荧??光蛋白的黄颡鱼胚胎共４５１枚，具全身广泛性表达黄颡鱼胚胎７７枚。由此可见，??显微注射技术可作为有效的转基因方法应用于黄颡鱼转基因制作。??２４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展[J]. 郑小梅,张晓立,于建东,郑平,孙际宾. 生物技术进展. 2015(01)
[2]转基因鱼的安全性及检测技术[J]. 李风铃,江艳华,姚琳,王联珠,翟毓秀. 食品安全质量检测学报. 2014(01)
[3]转基因鱼类生态安全的研究进展[J]. 吴晗,姜鹏,白俊杰. 中国农学通报. 2013(11)
[4]转基因鱼的研究进展与商业化前景[J]. 叶星,田园园,高风英. 遗传. 2011(05)
[5]Integration mechanisms of transgenes and population fitness of GH transgenic fish[J]. HU Wei & ZHU ZuoYan* State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China. Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[6]快速生长导致转“全鱼”生长激素基因鲤鱼临界游泳速度的降低[J]. 李德亮,傅萃长,胡炜,钟山,汪亚平,朱作言. 科学通报. 2007(08)
[7]转生长激素基因中华倒刺鲃的构建及其检测[J]. 丁洁,顾继锐,伍翠芳,李永文,张涛,吴江,谢显连,徐恒. 淡水渔业. 2006(03)
[8]黄颡鱼生长激素cDNA序列克隆及其序列分析[J]. 孙玉华,谢从新. 水利渔业. 2006(03)
[9]电脉冲作用将外源基因导入稀有鮈鲫精子的研究[J]. 钟家玉,茅卫锋,朱作言. 遗传学报. 2002(02)
[10]用精子载体法将MT-hGH基因导入泰山赤鳞鱼[J]. 翟玉梅,鹿培源,崔博文,王喆,时永香,杨晓梅,赵晶,岳永生. 海洋与湖沼. 2001(01)
本文编号：3497958
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