传染性胰脏坏死病酵母展示疫苗的免疫效果评价
发布时间：2021-11-27 12:54
为了评价前期构建的传染性胰脏坏死病毒（Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV）VP2蛋白酵母展示疫苗（EBY100/pYD1-VP2）的免疫保护效果,以虹鳟Oncorhynchus mykiss为试验动物分析了口服免疫的保护效力,利用流式细胞仪和细胞免疫荧光检测方法确定疫苗株的最佳诱导时间为60 h,然后大量制备酵母口服疫苗,分别利用单次和多次口灌的方式对虹鳟进行免疫;单次免疫为连续免疫7 d,多次免疫为单次免疫一周后再以相同剂量免疫7 d,免疫剂量均为每天100μL疫苗菌(1×1010 CFU/mL),同时设置空载体酵母菌免疫组和PBS模拟免疫组,通过免疫相关基因定量、中和抗体滴定及攻毒后IPNV病毒载量分析口服疫苗的保护效果。结果表明:疫苗株免疫组虹鳟头肾、后肠中的免疫相关基因IgM、IgT、CD4、CD8在各时间点的表达量均显著高于空载体酵母菌免疫组和PBS模拟免疫组（P<0.05）,且与单次免疫组相比,多次免疫组免疫相关基因表达量显著升高（P<0.05）;在疫苗株免疫组虹鳟血清中均发现了中和抗体,其中...
【文章来源】：大连海洋大学学报. 2020,35(06)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
EBY100/pYD1-VP2表面VP2蛋白的免疫荧光检测
利用RT-qPCR测定各组虹鳟攻毒后头肾、肝脏和脾脏混合组织样品中VP1和VP2基因表达量,以PBS模拟攻毒组虹鳟组织RNA为空白对照。从图6可见:在第14、21天时,空载体酵母免疫组虹鳟组织中VP1和VP2基因表达量均显著高于疫苗免疫组(P<0.05),其中空载体酵母单次和多次免疫组VP1基因表达量分别为疫苗株单次和多次免疫组的95、202倍和90、280倍,空载体酵母单次和多次免疫组VP2基因表达量分别为疫苗株单次和多次免疫组的90、237倍和83、220倍;在第14、21天,疫苗株单次免疫组VP1和VP2基因的表达量显著高于疫苗株多次免疫组(P<0.05),疫苗株单次免疫组为疫苗株多次免疫组的2.25、3.33倍(VP1)和2.67、2.80倍(VP2)。本研究结果表明,该酵母口服疫苗可使虹鳟体内的病毒载量显著降低(P<0.05),且多次免疫具有更强的抗病毒效果,各组攻毒虹鳟未出现IPNV病理性死亡。3 讨论
IPNV是一种高传染性、高致死率的病原体,对鲑鳟水产养殖业造成了巨大的经济损失。对鱼类病毒性疾病来说,疫苗是一种安全、高效的理想防控药物。目前全球只有挪威有一种IPN商业化疫苗为亚单位疫苗,该商业化亚单位疫苗主要针对Sp血清型IPNV,而中国现行IPNV毒株并非全是SP血清型。因此,中国IPN的有效防控只能依靠疫苗的自主研发,无法引进国外商业化疫苗。目前,渔用疫苗的免疫方式主要包括口服免疫、腹腔或肌肉注射免疫和浸泡免疫。口服疫苗可操作性强,过程简单方便,利于多次免疫,适合鱼苗的大规模免疫,可减小劳动强度,并且避免注射带来的疼痛和应激反应,尤其对于幼龄鱼,口服免疫带来的便利和安全更为显著[22]。另外,口服免疫需要的免疫剂量远远低于浸泡免疫,降低了经济成本[23]。本研究领域已见口服免疫预防IPN的报道,并取得了一定的效果。如张英[24]利用植物乳杆菌制备了IPNV(Sp血清型)VP2-VP3重组亚单位口服疫苗,Ahmadivand等[25]采用壳聚糖/三聚磷酸盐(CS-TPP)纳米颗粒和海藻酸盐包被IPNV(Sp血清型)核酸疫苗制备了口服疫苗。图4 免疫虹鳟CD4和CD8基因表达定量分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立[J]. 贺文斌,徐黎明,赵景壮,刘淼,任广明,卢彤岩,尹家胜. 大连海洋大学学报. 2019(05)
[2]虹鳟IPNV分离株VP2蛋白的表达及免疫原性检测[J]. 赵景壮,贺文斌,徐黎明,纪锋,曹永生,胡朝,卢彤岩. 大连海洋大学学报. 2019(02)
[3]一株虹鳟源传染性胰腺坏死病病毒的分离与鉴定[J]. 熊权鑫,朱玲,汪开毓,杨倩,贺扬,王二龙. 水产学报. 2018(07)
[4]鱼源植物乳杆菌表达IPNV VP2-VP3重组蛋白及其口服免疫程序[J]. 刘佳琪,高帅,段可馨,郭梦婷,杜航,康海燕,张英,唐立杰,李一经,刘敏. 水产学报. 2017(04)
[5]虹鳟传染性胰脏坏死病毒的分离鉴定及聚类分析[J]. 刘淼,徐黎明,赵景壮,曹永生,刘红柏,尹家胜,卢彤岩. 大连海洋大学学报. 2017(01)
[6]鱼类口服疫苗的研究进展[J]. 李珊珊,黄倢,田黎. 海洋湖沼通报. 2007(S1)
[7]口服免疫机制及口服疫苗的研究进展[J]. 李理. 医学分子生物学杂志. 2004(05)
[8]酵母表面展示系统研究进展[J]. 郭波,谢佩蓉,邹强,郑萍. 生物化学与生物物理进展. 2002(01)
[9]虹鳟鱼传染性胰腺坏死及其综合防治[J]. 刘兴发,杨继林,钟志宏,刘兆弼,黄琪琰,金海林. 中国动物检疫. 1997(01)
[10]虹鳟传染性胰脏坏死病病毒（IPNV）的初步研究[J]. 江育林,徐伯亥,李伟,李正秋,胡琦. 水生生物学报. 1989(04)
硕士论文
[1]传染性胰腺坏死病毒VP2-VP3虹鳟肠道乳杆菌表达系统的免疫学评价[D]. 张英.东北农业大学 2014
本文编号：3522332
【文章来源】：大连海洋大学学报. 2020,35(06)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
EBY100/pYD1-VP2表面VP2蛋白的免疫荧光检测
利用RT-qPCR测定各组虹鳟攻毒后头肾、肝脏和脾脏混合组织样品中VP1和VP2基因表达量,以PBS模拟攻毒组虹鳟组织RNA为空白对照。从图6可见:在第14、21天时,空载体酵母免疫组虹鳟组织中VP1和VP2基因表达量均显著高于疫苗免疫组(P<0.05),其中空载体酵母单次和多次免疫组VP1基因表达量分别为疫苗株单次和多次免疫组的95、202倍和90、280倍,空载体酵母单次和多次免疫组VP2基因表达量分别为疫苗株单次和多次免疫组的90、237倍和83、220倍;在第14、21天,疫苗株单次免疫组VP1和VP2基因的表达量显著高于疫苗株多次免疫组(P<0.05),疫苗株单次免疫组为疫苗株多次免疫组的2.25、3.33倍(VP1)和2.67、2.80倍(VP2)。本研究结果表明,该酵母口服疫苗可使虹鳟体内的病毒载量显著降低(P<0.05),且多次免疫具有更强的抗病毒效果,各组攻毒虹鳟未出现IPNV病理性死亡。3 讨论
IPNV是一种高传染性、高致死率的病原体,对鲑鳟水产养殖业造成了巨大的经济损失。对鱼类病毒性疾病来说,疫苗是一种安全、高效的理想防控药物。目前全球只有挪威有一种IPN商业化疫苗为亚单位疫苗,该商业化亚单位疫苗主要针对Sp血清型IPNV,而中国现行IPNV毒株并非全是SP血清型。因此,中国IPN的有效防控只能依靠疫苗的自主研发,无法引进国外商业化疫苗。目前,渔用疫苗的免疫方式主要包括口服免疫、腹腔或肌肉注射免疫和浸泡免疫。口服疫苗可操作性强,过程简单方便,利于多次免疫,适合鱼苗的大规模免疫,可减小劳动强度,并且避免注射带来的疼痛和应激反应,尤其对于幼龄鱼,口服免疫带来的便利和安全更为显著[22]。另外,口服免疫需要的免疫剂量远远低于浸泡免疫,降低了经济成本[23]。本研究领域已见口服免疫预防IPN的报道,并取得了一定的效果。如张英[24]利用植物乳杆菌制备了IPNV(Sp血清型)VP2-VP3重组亚单位口服疫苗,Ahmadivand等[25]采用壳聚糖/三聚磷酸盐(CS-TPP)纳米颗粒和海藻酸盐包被IPNV(Sp血清型)核酸疫苗制备了口服疫苗。图4 免疫虹鳟CD4和CD8基因表达定量分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立[J]. 贺文斌,徐黎明,赵景壮,刘淼,任广明,卢彤岩,尹家胜. 大连海洋大学学报. 2019(05)
[2]虹鳟IPNV分离株VP2蛋白的表达及免疫原性检测[J]. 赵景壮,贺文斌,徐黎明,纪锋,曹永生,胡朝,卢彤岩. 大连海洋大学学报. 2019(02)
[3]一株虹鳟源传染性胰腺坏死病病毒的分离与鉴定[J]. 熊权鑫,朱玲,汪开毓,杨倩,贺扬,王二龙. 水产学报. 2018(07)
[4]鱼源植物乳杆菌表达IPNV VP2-VP3重组蛋白及其口服免疫程序[J]. 刘佳琪,高帅,段可馨,郭梦婷,杜航,康海燕,张英,唐立杰,李一经,刘敏. 水产学报. 2017(04)
[5]虹鳟传染性胰脏坏死病毒的分离鉴定及聚类分析[J]. 刘淼,徐黎明,赵景壮,曹永生,刘红柏,尹家胜,卢彤岩. 大连海洋大学学报. 2017(01)
[6]鱼类口服疫苗的研究进展[J]. 李珊珊,黄倢,田黎. 海洋湖沼通报. 2007(S1)
[7]口服免疫机制及口服疫苗的研究进展[J]. 李理. 医学分子生物学杂志. 2004(05)
[8]酵母表面展示系统研究进展[J]. 郭波,谢佩蓉,邹强,郑萍. 生物化学与生物物理进展. 2002(01)
[9]虹鳟鱼传染性胰腺坏死及其综合防治[J]. 刘兴发,杨继林,钟志宏,刘兆弼,黄琪琰,金海林. 中国动物检疫. 1997(01)
[10]虹鳟传染性胰脏坏死病病毒（IPNV）的初步研究[J]. 江育林,徐伯亥,李伟,李正秋,胡琦. 水生生物学报. 1989(04)
硕士论文
[1]传染性胰腺坏死病毒VP2-VP3虹鳟肠道乳杆菌表达系统的免疫学评价[D]. 张英.东北农业大学 2014
本文编号：3522332
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