急性操作胁迫对刀鲚（Coilia nasus）应激反应的影响

发布时间：2021-11-28 05:51

　　刀鲚是一种经济价值极高的名贵鱼种,近年来由于水环境污染和过度捕捞,其天然种群资源急剧减少,目前已处于濒危状态。长江刀鲚素有出水即死的特点,应激反应极其强烈,人为手工操作容易受伤死亡,导致其人工繁殖过程遭受巨大的损失。为深入了解刀鲚急性胁迫下容易死亡的机理,探索有效的缓解方法,本研究首先通过放射免疫测定法测定急性操作胁迫对刀鲚头肾和血浆皮质醇含量的影响,利用同源克隆的方法获得刀鲚促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、硬骨鱼紧张肽（UI）、阿黑皮素原（POMC）基因的部分序列,并应用实时荧光定量PCR （qPCR）方法检测上述神经内分泌因子相关基因mRNA在急性操作胁迫前后的表达变化；然后,通过高通量测序技术分析对照组（C1）,相对抗应激组（S1）及敏感组（S2）之间表达谱的差异,筛选11个差异表达显著的基因进行荧光定量PCR验证,鉴定可能与抗应激相关的分子标记；最后测定刀鲚在不同浓度胁迫缓解剂SNP（NO供体）或10‰盐度条件下,急性操作胁迫对皮质醇、游离甲状腺素（FT4）和丙二醛水平的影响,分析不同SNP浓度及盐度条件对刀鲚应激反应的缓解作用,并利用刀鲚仔鱼前期及肝脏原代细胞为模型,深入... 

【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 导论
    1. 应激概念
    2. 应激对鱼类的影响
    3. 应激方法的建立
    4. 鱼类应激研究进展
    5. 高通量测序技术
        5.1. 主流高通量测序平台
        5.2. RNA-seq技术
    6. 鱼类应激研究存在的问题
    7. 展望
    8. 论文研究的目的和意义
    9. 创新点
第二章 急性操作胁迫对刀鲚应激反应相关神经内分泌因子的影响
    1. 引言
    2. 材料与方法
        2.1. 实验材料
        2.2. 实验方法
    3. 结果与分析
        3.1. 应激反应相关神经内分泌因子CRH,UI和POMC基因的克隆
        3.2. 急性操作应激反应中皮质醇的含量变化
        3.3. 手工捕捉对刀鲚CRH,UI和POMC基因表达水平的影响
    4. 讨论
    5. 小结
第三章 基于RNA-seq的刀鲚急性操作胁迫相关基因研究
    1. 引言
    2. 材料与方法
        2.1. 实验材料
        2.2. 实验方法
    3. 结果与分析
        3.1. 刀鲚样品RNA-Seq结果
        3.2. Unigene注释结果汇总
        3.3. 鉴定差异表达的mRNA
        3.4. qRT-PCR验证差异表达的基因
        3.5. 鉴定SNP与SSR
    4. 讨论
    5. 小结
第四章 探究NO及盐对刀鲚急性应激的缓解作用
    1. 引言
    2. 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3. 结果与分析
        3.1 不同组间刀鲚血浆、头肾中的皮质醇含量
        3.2 刀鲚在实验中的死亡率
        3.3 刀鲚血浆及头肾中的的皮质醇及血浆FT4含量的检测结果
        3.4 刀鲚肝脏MDA的检测结果
        3.5 水质的检测结果
        3.6 刀鲚仔鱼氧化应激实验结果
        3.7 刀鲚肝脏原代细胞ROS实验结果
    4. 讨论
    5. 小结
总结与展望
    1. 总结
    2. 今后可进一步开展以下工作
参考文献
附录Ⅰ 缩略语表
附录Ⅱ 攻读硕士学位期间发表的和待发表的论文
致谢



本文编号：3523835