无乳链球菌诱导吉富罗非鱼sIgM、mIgD重链基因的克隆及表达分析
发布时间:2021-12-22 17:49
吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)是我国南部沿海以及世界重要的养殖鱼类,食用价值和经济价值非常高。由于近年来养殖环境的恶化及养殖密度的增加,多种疾病相继发生,以链球菌病尤为突出,对罗非鱼养殖业造成了巨大的影响。免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是鱼类免疫系统应答中起到关键作用的体液因子。为了研究在外界病原菌感染吉富罗非鱼过程中,Ig基因在宿主免疫应答中的作用机制,我们分别对sIgM及mIgD这两种基因进行分子克隆、表达特征分析以及功能方面进行了研究。 1.以灭活的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)诱导后的吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为材料,构建其头肾SMART cDNA文库,应用同源性克隆和RACE-PCR技术克隆到吉富罗非鱼(O. niloticus)分泌型免疫球蛋白M(sIgM)以及膜结合型免疫球蛋白D(mIgD)重链基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。sIgM基因cDNA全长为1921bp,开放阅读框(ORF)为1740bp,5’端非编码区(5’-UTR)41bp,3’端非编码...
【文章来源】: 广东海洋大学广东省
【文章页数】:94 页
【文章目录】:
摘要
Abstract
英文缩略词
1 文献综述
1.1 研究对象
1.1.1 罗非鱼简介
1.1.2 无乳链球菌对吉富罗非鱼的危害
1.2 硬骨鱼类免疫系统及免疫机制研究
1.2.1 硬骨鱼类主要的免疫器官和组织
1.2.2 硬骨鱼类主要的免疫细胞
1.2.3 硬骨鱼类主要的免疫因子
1.3 硬骨鱼类免疫球蛋白的研究进展
1.3.1 IgM 的结构及功能
1.3.2 IgD 的结构及功能
1.3.3 新型免疫球蛋白
1.4 本研究的目的及意义
2 吉富罗非鱼 sIgM 和 mIgD 重链基因的克隆及序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 实验用鱼
2.1.2 实验仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 受体菌及质粒载体
2.1.5 主要溶液和培养基的配置
2.1.6 生物信息学分析所用软件
2.2 实验方法
2.2.1 吉富罗非鱼头肾总 RNA 的提取
2.2.2 吉富罗非鱼 sIgM 和 mIgD 重链基因的 RACE 克隆
2.3 结果与分析
2.3.1 吉富罗非鱼总 RNA 的提取
2.3.2 罗非鱼 cDNA 模板的合成
2.3.3 sIgM 基因克隆结果与序列分析
2.3.4 mIgD 基因克隆结果与序列分析
2.4 讨论
3 吉富罗非鱼 sIgM 和 mIgD 基因的表达差异研究
3.1 实验仪器及试剂
3.2 实验方法
3.2.1 灭活无乳链球菌的制备
3.2.2 吉富罗非鱼的暂养
3.2.3 免疫试验及样品采集
3.2.4 引物设计
3.2.5 总 RNA 的提取及 DNaseⅠ消化
3.2.6 Real-Time PCR(qRT-PCR)
3.2.7 数据统计及分析
3.3 实验结果
3.3.1 健康吉富罗非鱼体内 sIgM 和 mIgD 的组织表达差异
3.3.2 灭活无乳链球菌免疫罗非鱼后 sIgM 和 mIgD 在各组织中的时间表达差异
3.4 讨论
4 吉富罗非鱼 sIgM、mIgD 基因的原核表达及 SIGM 多克隆抗体的制备
4.1 实验材料
4.1.1 实验载体及菌株
4.1.2 实验动物
4.1.3 实验仪器
4.1.4 实验试剂和溶液
4.2 实验方法
4.2.1 sIgM 基因恒定区的原核表达
4.2.2 mIgD 基因恒定区的原核表达
4.2.3 兔抗罗非鱼 SIGM 多克隆抗体的制备
4.3 实验结果与分析
4.3.1 sIgM 基因的原核表达
4.3.2 mIgD 基因的原核表达
4.3.3 兔抗 SIGM 多克隆抗体的抗血清效价测定和特异性检测
4.4 讨论
5 SIGM 的免疫组织化学分析及免疫电镜分析
5.1 实验材料
5.1.1 实验动物
5.1.2 实验仪器
5.1.3 实验试剂及溶液
5.2 实验方法
5.2.1 免疫组化分析
5.2.2 免疫电镜分析
5.3 结果分析
5.3.1 免疫组织化学结果分析
5.3.2 免疫电镜结果分析
5.4 讨论
6 结论
6.1 吉富罗非鱼 sIgM、mIgD 重链基因的克隆
6.2 吉富罗非鱼 sIgM、mIgD 基因差异表达分析
6.3 sIgM 和 mIgD 基因的原核表达及 SIGM 多克隆抗体的制备
6.4 SIGM 的免疫组织化学分析及免疫电镜分析
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】:
期刊论文
[1]斜带石斑鱼IgM、IgZ和IgD重链基因的克隆 [J]. 黄贝,陈善楠,徐镇,聂品. 水产学报. 2012(07)
[2]军曹鱼Igμ重链的全长克隆及在各组织中的定量分析 [J]. 侯月娥,冯娟,郭志勋,郭吉余,徐力文,苏友禄. 水产学报. 2012(06)
[3]斑马鱼loc558117基因的多克隆抗体制备 [J]. 李志,姚立群,雷孝锋,王琨,莫小阳,吴秀山. 湖南师范大学自然科学学报. 2011(02)
[4]草鱼的两种新型免疫球蛋白基因IgZ-2和IgM-IgZ [J]. 肖凡书,许巧情,王欣欣,聂品. 水产学报. 2010(12)
[5]鱼类免疫球蛋白重链基因与基因座的研究进展 [J]. 肖凡书,聂品. 水产学报. 2010(10)
[6]广东省罗非鱼主养区无乳链球菌的分离、鉴定与致病性 [J]. 柯剑,赵飞,罗理,姜兰,卢迈新,邹为民. 广东海洋大学学报. 2010(03)
[7]兔抗双酚A多克隆抗体的制备 [J]. 石春红,姚卫蓉,孙秀兰,纪丽君. 安徽农业科学. 2010(08)
[8]鳜免疫球蛋白D重链基因的克隆与表达分析 [J]. 王改玲,骆彦萍,孙宝剑,徐镇,许巧情,聂品. 中国水产科学. 2010(01)
[9]罗非鱼免疫球蛋白(IgM)重链基因全长cDNA序列分析 [J]. 吴铁军,梁万文. 广西农业科学. 2009(08)
[10]2008年度广东省罗非鱼产业发展现状分析 [J]. 雷光英,曹俊明,万忠,崔建勋,李思发. 广东农业科学. 2009(07)
硕士论文
[1]大菱鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆及表达研究[D]. 丁冰洁.中国海洋大学. 2013
[2]大菱鲆免疫球蛋白D重链基因的克隆与表达研究[D]. 陈孔茂.中国海洋大学. 2013
本文编号:3546819
【文章来源】: 广东海洋大学广东省
【文章页数】:94 页
【文章目录】:
摘要
Abstract
英文缩略词
1 文献综述
1.1 研究对象
1.1.1 罗非鱼简介
1.1.2 无乳链球菌对吉富罗非鱼的危害
1.2 硬骨鱼类免疫系统及免疫机制研究
1.2.1 硬骨鱼类主要的免疫器官和组织
1.2.2 硬骨鱼类主要的免疫细胞
1.2.3 硬骨鱼类主要的免疫因子
1.3 硬骨鱼类免疫球蛋白的研究进展
1.3.1 IgM 的结构及功能
1.3.2 IgD 的结构及功能
1.3.3 新型免疫球蛋白
1.4 本研究的目的及意义
2 吉富罗非鱼 sIgM 和 mIgD 重链基因的克隆及序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 实验用鱼
2.1.2 实验仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 受体菌及质粒载体
2.1.5 主要溶液和培养基的配置
2.1.6 生物信息学分析所用软件
2.2 实验方法
2.2.1 吉富罗非鱼头肾总 RNA 的提取
2.2.2 吉富罗非鱼 sIgM 和 mIgD 重链基因的 RACE 克隆
2.3 结果与分析
2.3.1 吉富罗非鱼总 RNA 的提取
2.3.2 罗非鱼 cDNA 模板的合成
2.3.3 sIgM 基因克隆结果与序列分析
2.3.4 mIgD 基因克隆结果与序列分析
2.4 讨论
3 吉富罗非鱼 sIgM 和 mIgD 基因的表达差异研究
3.1 实验仪器及试剂
3.2 实验方法
3.2.1 灭活无乳链球菌的制备
3.2.2 吉富罗非鱼的暂养
3.2.3 免疫试验及样品采集
3.2.4 引物设计
3.2.5 总 RNA 的提取及 DNaseⅠ消化
3.2.6 Real-Time PCR(qRT-PCR)
3.2.7 数据统计及分析
3.3 实验结果
3.3.1 健康吉富罗非鱼体内 sIgM 和 mIgD 的组织表达差异
3.3.2 灭活无乳链球菌免疫罗非鱼后 sIgM 和 mIgD 在各组织中的时间表达差异
3.4 讨论
4 吉富罗非鱼 sIgM、mIgD 基因的原核表达及 SIGM 多克隆抗体的制备
4.1 实验材料
4.1.1 实验载体及菌株
4.1.2 实验动物
4.1.3 实验仪器
4.1.4 实验试剂和溶液
4.2 实验方法
4.2.1 sIgM 基因恒定区的原核表达
4.2.2 mIgD 基因恒定区的原核表达
4.2.3 兔抗罗非鱼 SIGM 多克隆抗体的制备
4.3 实验结果与分析
4.3.1 sIgM 基因的原核表达
4.3.2 mIgD 基因的原核表达
4.3.3 兔抗 SIGM 多克隆抗体的抗血清效价测定和特异性检测
4.4 讨论
5 SIGM 的免疫组织化学分析及免疫电镜分析
5.1 实验材料
5.1.1 实验动物
5.1.2 实验仪器
5.1.3 实验试剂及溶液
5.2 实验方法
5.2.1 免疫组化分析
5.2.2 免疫电镜分析
5.3 结果分析
5.3.1 免疫组织化学结果分析
5.3.2 免疫电镜结果分析
5.4 讨论
6 结论
6.1 吉富罗非鱼 sIgM、mIgD 重链基因的克隆
6.2 吉富罗非鱼 sIgM、mIgD 基因差异表达分析
6.3 sIgM 和 mIgD 基因的原核表达及 SIGM 多克隆抗体的制备
6.4 SIGM 的免疫组织化学分析及免疫电镜分析
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】:
期刊论文
[1]斜带石斑鱼IgM、IgZ和IgD重链基因的克隆 [J]. 黄贝,陈善楠,徐镇,聂品. 水产学报. 2012(07)
[2]军曹鱼Igμ重链的全长克隆及在各组织中的定量分析 [J]. 侯月娥,冯娟,郭志勋,郭吉余,徐力文,苏友禄. 水产学报. 2012(06)
[3]斑马鱼loc558117基因的多克隆抗体制备 [J]. 李志,姚立群,雷孝锋,王琨,莫小阳,吴秀山. 湖南师范大学自然科学学报. 2011(02)
[4]草鱼的两种新型免疫球蛋白基因IgZ-2和IgM-IgZ [J]. 肖凡书,许巧情,王欣欣,聂品. 水产学报. 2010(12)
[5]鱼类免疫球蛋白重链基因与基因座的研究进展 [J]. 肖凡书,聂品. 水产学报. 2010(10)
[6]广东省罗非鱼主养区无乳链球菌的分离、鉴定与致病性 [J]. 柯剑,赵飞,罗理,姜兰,卢迈新,邹为民. 广东海洋大学学报. 2010(03)
[7]兔抗双酚A多克隆抗体的制备 [J]. 石春红,姚卫蓉,孙秀兰,纪丽君. 安徽农业科学. 2010(08)
[8]鳜免疫球蛋白D重链基因的克隆与表达分析 [J]. 王改玲,骆彦萍,孙宝剑,徐镇,许巧情,聂品. 中国水产科学. 2010(01)
[9]罗非鱼免疫球蛋白(IgM)重链基因全长cDNA序列分析 [J]. 吴铁军,梁万文. 广西农业科学. 2009(08)
[10]2008年度广东省罗非鱼产业发展现状分析 [J]. 雷光英,曹俊明,万忠,崔建勋,李思发. 广东农业科学. 2009(07)
硕士论文
[1]大菱鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆及表达研究[D]. 丁冰洁.中国海洋大学. 2013
[2]大菱鲆免疫球蛋白D重链基因的克隆与表达研究[D]. 陈孔茂.中国海洋大学. 2013
本文编号:3546819
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