拮抗菌的筛选及其对无乳链球菌粘附罗非鱼粘液的拮抗作用研究

发布时间：2022-01-16 14:52

　　罗非鱼广泛分布于热带、亚热带的淡水和咸淡水水域,具有肉质细嫩、生长快速、繁殖力强等特点,1976年被联合国粮农组织作为优良品种向全世界推广养殖。然而自2008年以来,无乳链球菌病（Streptococcus agalactiae）每年都会给我国的罗非鱼养殖业造成巨大的经济损失。目前,该病尚无有效的防治措施。拮抗菌可通过与病原菌竞争性粘附到水产动物体表及与外界相通的腔道,抑制病原菌对水产动物的粘附作用,从而阻断病原菌对宿主的侵袭,达到预防疾病的目的。因此,本文通过优化检测条件,建立了检测无乳链球菌的间接ELISA方法,进而研究了无乳链球菌对罗非鱼粘液的粘附特性,以及无乳链球菌对罗非鱼体表、鳃及肠道粘液的粘附情况,利用从不同环境中筛选得到的59株无乳链球菌拮抗菌,研究了拮抗菌通过竞争、置换和排斥作用对无乳链球菌粘附罗非鱼不同部位粘液的拮抗效果,最后结合安全性试验从中筛选到2株对无乳链球菌具有显著拮抗粘附作用的菌株,具体研究结果如下：本文建立的检测无乳链球菌的间接ELISA试验方法最适条件如下：利用10%的小牛血清封闭作用60min,1：100的一抗浓度37℃条件下作用1h,1：2000的二... 

【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 综述
    1 罗非鱼无乳链球菌疾病
        1.1 罗非鱼养殖概况
        1.2 罗非鱼无乳链球菌疾病
        1.3 无乳链球菌流行病学
        1.4 致病机理
        1.5 毒力因子
    2 罗非鱼无乳链球菌防治方法
        2.1 改善养殖环境
        2.2 抗生素
        2.3 中草药
        2.4 疫苗
        2.5 益生菌
            2.5.1 益生菌的作用机制
            2.5.2 益生菌对水产动物所起的作用
            2.5.3 益生菌在水产养殖中的应用
    3 粘附作用
        3.1 粘附的影响因素
            3.1.1 细菌的起始粘附浓度
            3.1.2 细菌本身的活力
            3.1.3 细菌的粘附作用时间
            3.1.4 温度
            3.1.5 相关离子浓度
            3.1.6 pH值
            3.1.7 其他影响因素
        3.2 粘附素
            3.2.1 菌毛粘附素
            3.2.2 非菌毛粘附素
        3.3 拮抗粘附
    4 本文的目的意义
第二章 无乳链球菌对罗非鱼粘液粘附特性研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 主要试剂与仪器
            1.2.1 主要试剂及其配制
            1.2.2 主要仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 菌液制备
            1.3.2 罗非鱼粘液的制备
            1.3.3 无乳链球菌间接ELISA检测方法的建立
            1.3.4 无乳链球菌对罗非鱼粘液粘附特性的研究
            1.3.5 数据处理
    2 结果
        2.1 无乳链球菌间接ELISA法试验条件的优化
            2.1.1 小牛血清作用浓度
            2.1.2 小牛血清作用时间
            2.1.3 一抗作用浓度
            2.1.4 一抗作用时间
            2.1.5 一抗作用温度
            2.1.6 二抗作用浓度
            2.1.7 二抗作用时间
            2.1.8 显色反应时间
            2.1.9 显色反应温度
        2.2 无乳链球菌对罗非鱼粘液的粘附特性
            2.2.1 菌浓度对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.2 粘液作用浓度对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.3 粘液作用时间对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.4 不同部位粘液对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.5 粘附时间对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.6 温度对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.7 pH值对无乳链球菌粘附作用的影响
            2.2.8 盐度对无乳链球菌粘附作用的影响
    3 讨论
第三章 无乳链球菌拮抗菌的分离、鉴定及多样性分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 主要试剂与仪器
            1.2.1 主要试剂及其配制
            1.2.2 主要仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 实验样品的采集
            1.3.2 细菌的分离与培养
            1.3.3 拮抗菌的筛选
            1.3.4 拮抗菌的安全性试验
            1.3.5 16S rDNA鉴定
    2 结果
        2.1 拮抗菌的筛选
        2.2 拮抗菌的安全性试验
        2.3 16S rDNA基因序列分析和系统发育树构建
    3 讨论
第四章 拮抗菌对无乳链球菌粘附罗非鱼粘液的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 主要试剂与仪器
            1.2.1 主要试剂及其配制
            1.2.2 主要仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 菌液制备
            1.3.2 罗非鱼粘液的制备
            1.3.3 拮抗菌对无乳链球菌粘附粘液的影响
            1.3.4 处理实验数据
    2 结果
        2.1 拮抗菌对无乳链球菌粘附罗非鱼的粘附竞争
            2.1.1 体表粘液
            2.1.2 鳃粘液
            2.1.3 肠道粘液
        2.2 拮抗菌对无乳链球菌粘附罗非鱼的粘附置换
            2.2.1 体表粘液
            2.2.2 鳃粘液
            2.2.3 肠道粘液
        2.3 拮抗菌对无乳链球菌粘附罗非鱼的粘附排斥
            2.3.1 体表粘液
            2.3.2 鳃粘液
            2.3.3 肠道粘液
    3 讨论
参考文献
作者在读期间论文发表及参研课题情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[3]罗非鱼链球菌病疫苗的研究进展[J]. 吴南,郭佳,熊丽,张永安.  南方水产科学. 2013(06)
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硕士论文
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[2]无乳链球菌FbsA和α-enolase基因的克隆、表达及其免疫效果研究[D]. 易婷.中山大学 2013
[3]海南罗非鱼链球菌病病原分离鉴定及防治中草药筛选[D]. 邓恒为.海南大学 2013
[4]广西罗非鱼链球菌的分离鉴定、药敏试验与病理学研究[D]. 柒壮林.南京农业大学 2012
[5]病原性河流弧菌对青石斑鱼的粘附定植作用研究[D]. 赵敏慧.集美大学 2009



本文编号：3592880