靶向于Nrf2-ARE信号的抗鲤春病毒血症病毒研究
发布时间：2022-01-21 21:49
前期研究发现,鲤春病毒血症病毒（Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV）感染EPC细胞可以诱导氧化应激,下调血红素加氧酶1（Heme oxygen-1,HO-1）的表达,扰乱细胞内氧化还原平衡,造成DNA和蛋白质氧化损伤,是SVCV重要的致病机制之一。Nrf2-ARE是机体对抗氧化应激最重要的内源性信号通路,由Nrf2介导的下游效应基因在细胞抗氧化、抗炎症、抗凋亡等过程中发挥着关键性作用,并参与到多种病毒的感染和复制过程中。为此,本研究系统探讨了Nrf2-ARE信号通路与SVCV之间的相互作用关系,其结果有助于深入了解SVCV的致病机理,为SVCV的预防和治疗提供新的解决方案。主要研究结果如下:1.激活剂SFN和CDDO-Me对Nrf2-ARE信号通路的激活效果以及对SVCV复制的影响用MTT法测定了Nrf2的激活剂SFN和CDDO-Me对FHM细胞的LD50（48h）分别为37.65μM和6.823μM。接着,通过RT-q PCR和Western blot在细胞水平上检测两种激活剂对FHM细胞Nrf2-ARE信号通路的激活效果。结果显示,SFN处理前期N...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
第一章 文献综述
1. 鲤春病毒血症病毒研究进展
1.1 SVC流行特点
1.2 SVCV生物学特征
1.3 SVCV致病机制
1.3.1 细胞自噬与SVCV复制
1.3.2 氧化应激与SVCV复制
2. Nrf2-ARE信号通路的研究进展
2.1 Nrf2-ARE信号通路的激活途径
2.2 Nrf2-ARE信号通路的激活剂
2.3 Nrf2-ARE信号通路在病毒相关疾病中的作用
3. 本研究的目的与意义
第二章 Nrf2-ARE信号在SVCV复制中的作用研究
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 细胞与病毒
1.1.2 实验试剂
1.1.3 siRNA的设计与合成
1.1.4 PCR引物的设计与合成
1.1.5 试剂配制
1.1.6 实验仪器设备
1.2 试验方法
1.2.1 FHM细胞复苏及传代培养
1.2.2 MTT法测定药物毒性
1.2.3 RT-qPCR检测激活剂对Nrf2及其下游效应基因表达的作用
1.2.3.1 细胞总RNA提取
1.2.3.2 反转录
1.2.3.3 Real-time PCR
1.2.4 免疫印迹实验
1.2.4.1 细胞总蛋白的提取
1.2.4.2 蛋白定量
1.2.4.3 蛋白电泳
1.2.4.4 转膜
1.2.4.5 免疫反应
1.2.4.6 化学发光法检测
1.2.5 FRAP法检测激活剂处理后的细胞总抗氧化能力
1.2.6 激活剂处理后的病毒感染
1.2.7 Real-time PCR检测SVCV-G的表达
1.2.8 Reed-Muench两氏法检测激活剂处理后病毒滴度
1.2.9 瞬时细胞转染
1.3 统计分析
2. 结果与分析
2.1 激活剂SFN和CDDO-Me对FHM细胞的毒性
2.2 激活剂处理FHM细胞后Nrf2及下游抗氧化基因的转录和表达分析
2.3 激活剂处理后FHM细胞总抗氧化能力T-AOC的测定
2.4 激活剂处理后SVCV-G基因的定量分析
2.5 激活剂处理后SVCV滴度的测定
2.6 Nrf2-siRNA干扰效率的验证及选择
2.7 Nrf2敲降后激活剂对Nrf2及下游效应基因转录和表达水平的影响
2.8 Nrf2-siRNA干扰后细胞总抗氧化能力T-AOC的测定
2.9 Nrf2敲降后SVCV-G基因的定量分析
2.10 HO-1 敲降后SVCV-G基因的定量分析
3. 讨论
参考文献
附表：硕士期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative stress modulation in hepatitis C virus infected cells[J]. Sonia A Lozano-Sepulveda,Owen L Bryan-Marrugo,Carlos Cordova-Fletes,Maria C Gutierrez-Ruiz,Ana M Rivas-Estilla. World Journal of Hepatology. 2015(29)
[2]鲤春病毒血症病毒G蛋白的研究进展[J]. 张家林,李洋,李强. 生物技术通报. 2014(05)
[3]Nrf2通路在肿瘤化学预防中的研究进展[J]. 王秀君,李欣,唐修文. 化学进展. 2013(09)
[4]黄芪甲苷和三七的三种有效成分配伍对小鼠脑缺血/再灌注后氧化应激和Nrf2/HO-1途径的影响[J]. 黄小平,邓常清,邱咏园,王蓓,唐映红,曾嵘. 中国药理学通报. 2013(11)
[5]Nrf2/ARE信号通路及其相关药物研究进展[J]. 潘晓菲,谭初兵,时丽丽,张洁,徐为人,汤立达. 药物评价研究. 2013(01)
[6]Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白[J]. 李航,段惠军. 中国药理学通报. 2011(03)
[7]鲤春病毒血症病毒（SVCV）的研究进展[J]. 付峰,刘荭,黄倢,蔡生力. 中国水产科学. 2006(02)
博士论文
[1]EGCG通过上调Nrf2/HO-1途径降低PM2.5所致HUVEC氧化损伤的机制研究[D]. 杨光照.山西医科大学 2015
[2]萝卜硫素在小鼠糖尿病肾病中的肾脏保护机制研究[D]. 孔丽丽.吉林大学 2015
[3]萝卜硫素通过上调Nrf2的表达和功能减少糖尿病小鼠睾丸细胞凋亡的研究[D]. 王永刚.吉林大学 2015
[4]NRF2抗氧化应激信号通路的活化在糖尿病肾病中的保护作用及其机制研究[D]. 尚果果.复旦大学 2014
[5]Nrf2活化在防治小鼠糖尿病肾病过程中的作用[D]. 崔文鹏.吉林大学 2014
[6]Nrf2在病毒性心肌炎小鼠中的作用及葛根素干预的研究[D]. 张晓梅.吉林大学 2013
[7]Sulforaphane激活并上调Nrf2预防糖尿病心肌病的研究[D]. 白杨.吉林大学 2012
[8]调控Nrf2-ARE通路对小鼠脊髓损伤治疗作用的实验研究[D]. 茅磊.南京大学 2011
[9]Nrf2-ARE通路在大鼠脊髓损伤后的神经保护作用[D]. 王笑亮.南京大学 2011
硕士论文
[1]齐墩果烷三萜类化合物CDDO-Me治疗C57BL/6小鼠放射性肺损伤的实验研究[D]. 张翠影.宁夏医科大学 2015
[2]Nrf2/HO-1通路在氧化应激致终末期肾病血管钙化中的作用及机制研究[D]. 张文松.川北医学院 2015
[3]siRNA沉默Nrf2基因对骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的影响及机制研究[D]. 邓文文.遵义医学院 2014
[4]SVCV感染EPC细胞诱导细胞自噬的分子机制及蛋白质组学研究[D]. 柳力月.华中农业大学 2014
[5]EPC抗氧化应激通路Nrf2/ARE对鲤春病毒的响应[D]. 杨毅.华中农业大学 2014
[6]莱菔硫烷减轻大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用机制研究[D]. 李智涛.昆明医科大学 2014
[7]Nrf-2信号通路在大鼠脓毒症急性肺损伤中的保护机制[D]. 刘涛.第二军医大学 2014
[8]五味子经Nrf2信号通路调节肝脏药物代谢酶及转运体的研究[D]. 何金莲.广州中医药大学 2014
[9]莱菔硫烷激活Nrf2-ARE通路拮抗PC12细胞氧化应激损伤的机制研究[D]. 鲍兵.南昌大学医学院 2013
[10]莱菔硫烷对脂肪细胞的转分化诱导作用及分子机制研究[D]. 陈士勇.宁波大学 2013
本文编号：3601017
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
第一章 文献综述
1. 鲤春病毒血症病毒研究进展
1.1 SVC流行特点
1.2 SVCV生物学特征
1.3 SVCV致病机制
1.3.1 细胞自噬与SVCV复制
1.3.2 氧化应激与SVCV复制
2. Nrf2-ARE信号通路的研究进展
2.1 Nrf2-ARE信号通路的激活途径
2.2 Nrf2-ARE信号通路的激活剂
2.3 Nrf2-ARE信号通路在病毒相关疾病中的作用
3. 本研究的目的与意义
第二章 Nrf2-ARE信号在SVCV复制中的作用研究
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 细胞与病毒
1.1.2 实验试剂
1.1.3 siRNA的设计与合成
1.1.4 PCR引物的设计与合成
1.1.5 试剂配制
1.1.6 实验仪器设备
1.2 试验方法
1.2.1 FHM细胞复苏及传代培养
1.2.2 MTT法测定药物毒性
1.2.3 RT-qPCR检测激活剂对Nrf2及其下游效应基因表达的作用
1.2.3.1 细胞总RNA提取
1.2.3.2 反转录
1.2.3.3 Real-time PCR
1.2.4 免疫印迹实验
1.2.4.1 细胞总蛋白的提取
1.2.4.2 蛋白定量
1.2.4.3 蛋白电泳
1.2.4.4 转膜
1.2.4.5 免疫反应
1.2.4.6 化学发光法检测
1.2.5 FRAP法检测激活剂处理后的细胞总抗氧化能力
1.2.6 激活剂处理后的病毒感染
1.2.7 Real-time PCR检测SVCV-G的表达
1.2.8 Reed-Muench两氏法检测激活剂处理后病毒滴度
1.2.9 瞬时细胞转染
1.3 统计分析
2. 结果与分析
2.1 激活剂SFN和CDDO-Me对FHM细胞的毒性
2.2 激活剂处理FHM细胞后Nrf2及下游抗氧化基因的转录和表达分析
2.3 激活剂处理后FHM细胞总抗氧化能力T-AOC的测定
2.4 激活剂处理后SVCV-G基因的定量分析
2.5 激活剂处理后SVCV滴度的测定
2.6 Nrf2-siRNA干扰效率的验证及选择
2.7 Nrf2敲降后激活剂对Nrf2及下游效应基因转录和表达水平的影响
2.8 Nrf2-siRNA干扰后细胞总抗氧化能力T-AOC的测定
2.9 Nrf2敲降后SVCV-G基因的定量分析
2.10 HO-1 敲降后SVCV-G基因的定量分析
3. 讨论
参考文献
附表：硕士期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative stress modulation in hepatitis C virus infected cells[J]. Sonia A Lozano-Sepulveda,Owen L Bryan-Marrugo,Carlos Cordova-Fletes,Maria C Gutierrez-Ruiz,Ana M Rivas-Estilla. World Journal of Hepatology. 2015(29)
[2]鲤春病毒血症病毒G蛋白的研究进展[J]. 张家林,李洋,李强. 生物技术通报. 2014(05)
[3]Nrf2通路在肿瘤化学预防中的研究进展[J]. 王秀君,李欣,唐修文. 化学进展. 2013(09)
[4]黄芪甲苷和三七的三种有效成分配伍对小鼠脑缺血/再灌注后氧化应激和Nrf2/HO-1途径的影响[J]. 黄小平,邓常清,邱咏园,王蓓,唐映红,曾嵘. 中国药理学通报. 2013(11)
[5]Nrf2/ARE信号通路及其相关药物研究进展[J]. 潘晓菲,谭初兵,时丽丽,张洁,徐为人,汤立达. 药物评价研究. 2013(01)
[6]Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白[J]. 李航,段惠军. 中国药理学通报. 2011(03)
[7]鲤春病毒血症病毒（SVCV）的研究进展[J]. 付峰,刘荭,黄倢,蔡生力. 中国水产科学. 2006(02)
博士论文
[1]EGCG通过上调Nrf2/HO-1途径降低PM2.5所致HUVEC氧化损伤的机制研究[D]. 杨光照.山西医科大学 2015
[2]萝卜硫素在小鼠糖尿病肾病中的肾脏保护机制研究[D]. 孔丽丽.吉林大学 2015
[3]萝卜硫素通过上调Nrf2的表达和功能减少糖尿病小鼠睾丸细胞凋亡的研究[D]. 王永刚.吉林大学 2015
[4]NRF2抗氧化应激信号通路的活化在糖尿病肾病中的保护作用及其机制研究[D]. 尚果果.复旦大学 2014
[5]Nrf2活化在防治小鼠糖尿病肾病过程中的作用[D]. 崔文鹏.吉林大学 2014
[6]Nrf2在病毒性心肌炎小鼠中的作用及葛根素干预的研究[D]. 张晓梅.吉林大学 2013
[7]Sulforaphane激活并上调Nrf2预防糖尿病心肌病的研究[D]. 白杨.吉林大学 2012
[8]调控Nrf2-ARE通路对小鼠脊髓损伤治疗作用的实验研究[D]. 茅磊.南京大学 2011
[9]Nrf2-ARE通路在大鼠脊髓损伤后的神经保护作用[D]. 王笑亮.南京大学 2011
硕士论文
[1]齐墩果烷三萜类化合物CDDO-Me治疗C57BL/6小鼠放射性肺损伤的实验研究[D]. 张翠影.宁夏医科大学 2015
[2]Nrf2/HO-1通路在氧化应激致终末期肾病血管钙化中的作用及机制研究[D]. 张文松.川北医学院 2015
[3]siRNA沉默Nrf2基因对骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的影响及机制研究[D]. 邓文文.遵义医学院 2014
[4]SVCV感染EPC细胞诱导细胞自噬的分子机制及蛋白质组学研究[D]. 柳力月.华中农业大学 2014
[5]EPC抗氧化应激通路Nrf2/ARE对鲤春病毒的响应[D]. 杨毅.华中农业大学 2014
[6]莱菔硫烷减轻大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用机制研究[D]. 李智涛.昆明医科大学 2014
[7]Nrf-2信号通路在大鼠脓毒症急性肺损伤中的保护机制[D]. 刘涛.第二军医大学 2014
[8]五味子经Nrf2信号通路调节肝脏药物代谢酶及转运体的研究[D]. 何金莲.广州中医药大学 2014
[9]莱菔硫烷激活Nrf2-ARE通路拮抗PC12细胞氧化应激损伤的机制研究[D]. 鲍兵.南昌大学医学院 2013
[10]莱菔硫烷对脂肪细胞的转分化诱导作用及分子机制研究[D]. 陈士勇.宁波大学 2013
本文编号：3601017
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