大黄鱼内脏白点病病原菌的快速鉴定及其抗感染中药预防免疫

发布时间：2022-02-19 00:40

　　目的用多重PCR法鉴别香鱼假单胞菌;探索香鱼假单胞菌表面抗原的免疫活性;筛选出对香鱼假单胞菌具有抑菌作用的中草药;以合适的途径对大黄鱼进行给药,检测大黄鱼免疫学因子和抗病能力的变化情况,建立中草药对大黄鱼香鱼假单胞菌病的防治技术。方法①设计并合成3对特异性引物,进行多重PCR。②制备香鱼假单胞菌的主要表面抗原包括脂多糖、外膜蛋白、生物膜多糖和灭活全菌疫苗,注射免疫大黄鱼;免疫28天后,检测试验鱼血清抗体效价、白细胞吞噬活性和溶菌酶活性,免疫28天和35天后通过人工攻击试验检测免疫保护率。③通过纸片琼脂扩散法进行体外抑菌实验,筛选出对香鱼假单胞菌具有抑菌作用的中草药。④制备中草药药物饵料,投喂大黄鱼进行非特异免疫;检测超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等的活性;检测中草药体内抑菌作用。结果①多重PCR反应后,香鱼假单胞菌致病菌株出现3条目的基因片段。②所有免疫组都激发了显著的体液和非特异性免疫应答,但在人工攻击后均未起到有效的免疫保护作用。③筛选出了五倍子、黄芩、党参等对香鱼假单胞菌具有明显抑菌作用的6种中草药。④喂养不同中草药28天后,黄芩组、黄芪组和党参组表现了一定水平的保护力。说明中草药对... 

【文章来源】：浙江中医药大学浙江省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
实验一、多重PCR鉴定香鱼假单胞菌
    (一) 实验材料与方法
        1. 实验菌株
        2. 实验试剂
        3. 实验仪器
        4. 实验方法
    (二) 试验结果
        1. CTAB法提取细菌DNA结果
        2. 多重PCR反应体系的建立和优化
        3. 多重PCR的特异性检测
        4. 多重PCR敏感性检测
    (三) 分析与讨论
    (四) 小结
实验二、香鱼假单胞菌表面抗原和灭活全菌苗对大黄鱼的免疫效果
    (一) 实验材料与方法
        1. 实验用鱼
        2. 菌株与试剂
        3. 抗原的准备
        4. 实验方法
    (二) 实验结果
        1. 白细胞的吞噬活性和血清溶菌酶的测定
        2. 抗体效价的测定
        3. 人工攻毒实验和免疫保护率的检测
        4. 病鱼组织超微结构观察结果
    (三) 分析与讨论
        1. 各表面抗原和全菌疫苗免疫效果
        2. 香鱼假单胞菌在细胞内的生存和复制
    (四) 小结
实验三、筛选对香鱼假单胞菌具有抑制作用的中药
    (一) 实验材料与方法
        1. 实验材料
        2. 实验方法
    (二) 实验结果
        1. 中草药对鱼类病菌的初筛结果
        2. 中草药对实验菌株的抑菌作用
        3. 各种中草药的MIC和MBC
    (三) 分析讨论
        1. 对中草药在水产养殖中应用的认识
        2. 中草药对病原菌抑制作用效果
    (四) 小结
实验四、中药投喂对大黄鱼免疫活性的影响
    (一) 实验材料与方法
        1. 中草药药物饵料的制备
        2. 试验鱼的暂养
        3. 菌株与试剂
        4. 实验方法
    (二) 实验结果
        1. 白细胞吞噬活性
        2. 溶菌酶活性
        3. SOD活性
        4. CAT活性
        5. 人工攻击试验结果
    (三) 讨论与分析
    (四) 小结
结论
参考文献
附图
致谢
文献综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]复方中草药对鲫鱼免疫力的影响[J]. 盛竹梅,马志宏,黄文,杨华莲,马立鸣,申惠卿,曹洁,曹爱英.  四川农业大学学报. 2012(04)
[2]大黄鱼（Larimichthys crocea）内脏白点病的病原分离和组织病理学观察[J]. 邱杨玉,郑磊,毛芝娟,陈孝煊.  微生物学通报. 2012(03)
[3]黄芪多糖对齐口裂腹鱼生长、体组成和免疫指标的影响[J]. 向枭,陈建,周兴华,王文娟.  水生生物学报. 2011(02)
[4]2010年水产养殖病害发生情况与2011年流行趋势分析[J]. 陈爱平,刘富林,吴凡修.  中国水产. 2011(03)
[5]鱼类致病鰤鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）的LAMP检测技术建立与应用[J]. 王国良,刘璐,徐益军.  海洋与湖沼. 2011(01)
[6]黄芪对半滑舌鳎非特异免疫活性的影响[J]. 刘金海,王宏志,王文阳.  饲料工业. 2011(02)
[7]复方中草药对奥尼罗非鱼血液非特异性免疫功能的影响[J]. 张照红,林旋,张伟妮,王全溪,李辉选,姚华阳,王寿昆.  水产科学. 2011(01)
[8]宁德市大黄鱼成鱼养殖现状及对策[J]. 廖红梅,林培华,高健.  贵州农业科学. 2011(01)
[9]大黄鱼溃疡病的组织病理和超微病理研究[J]. 戴瑜来,吕永林,李凯,陶震,王国良.  热带海洋学报. 2010(05)
[10]黄芪多糖对仿刺参非特异性免疫功能的影响[J]. 樊英,王淑娴,叶海斌,许拉,朱安成,杨秀生,李天保.  水产科学. 2010(06)

硕士论文
[1]浙江大黄鱼养殖产业化发展研究[D]. 陈飞.浙江海洋学院 2011
[2]网箱养殖大黄鱼主要疾病的预报模型研究[D]. 周瑞娟.宁波大学 2011



本文编号：3631856