α 2 肾上腺素受体和五羟色胺2A受体在厚壳贻贝变态中的作用
发布时间：2022-02-19 02:34
肾上腺素和五羟色胺作为重要的神经递质,广泛分布在生物体内,在神经元、感受器间的化学突触中发挥着重要的信使作用,参与各种复杂的生命活动,在调节内环境稳态等方面发挥着重要的作用。在以往的研究中发现肾上腺素和五羟色胺可以诱导多种软体动物包括厚壳贻贝幼虫发生变态,但对它们的分子通路尚不清楚。本研究以厚壳贻贝（Mytilus coruscus）为研究对象,对肾上腺素诱导变态前后幼虫的蛋白质组学进行了探究,并研究了肾上腺素受体和五羟色胺受体在厚壳贻贝幼虫变态中的功能作用。主要结果如下:1.肾上腺素诱导厚壳贻贝幼虫变态前后蛋白质组差异分析本研究利用Label-free技术分离筛选厚壳贻贝幼虫变态过程中的差异表达的蛋白,进一步利用PRM技术鉴定幼虫变态过程中发育相关的关键蛋白,共筛选出458个差异蛋白。涉及的信号通路包括肾上腺素信号通路,G蛋白偶联受体信号通路,蛋白磷酸化信号通路,并涉及到细胞骨架,能量代谢和转录翻译等基本细胞结构和生理活动。本研究进一步揭示了肾上腺素信号通路在厚壳贻贝变态过程中的重要作用,并为全面解析变态过程的蛋白响应机制提供基础,为了解海洋双壳类变态机制提供参考。2.厚壳贻贝α
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 海洋无脊椎动物变态发育相关分子机制研究
1.1 海洋无脊椎动物变态发育
1.1.1 什么是变态
1.1.2 海洋无脊椎动物幼虫的变态
1.1.3 海洋幼虫的变态和发育
1.2 海洋无脊椎动物的变态分子机制
1.2.1 模式生物:果蝇
1.2.2 两栖动物:青蛙
1.2.3 脊索动物:海鞘
1.2.4 节肢动物门:藤壶
1.3 肾上腺素受体和五羟色胺受体在附着变态中的调控作用
1.3.1 肾上腺素受体在附着变态中的调控作用
1.3.2 5 -羟色胺受体在附着变态中的调控作用
1.4 本研究目的、意义及研究思路
1.4.1 研究目的与意义
1.4.2 科学问题
1.4.3 预期成果
1.4.4 技术路线
第二章 肾上腺素诱导厚壳贻贝幼虫变态前后蛋白质组差异分析
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 幼虫培育与样品采集
2.2.2 Label-free定量的实验流程
2.2.3 PRM定量蛋白质组检测
2.2.4 蛋白质鉴定和定量
2.2.5 差异蛋白的功能分析
2.3 实验结果
2.3.1 蛋白质数据统计分析
2.3.2 差异蛋白分析
2.3.3 通过GO通路和KEGG通路富集分析评估差异表达的蛋白质
2.3.4 通过PRM验证差异表达的蛋白质
2.4 讨论
第三章 厚壳贻贝α_2肾上腺素受体和五羟色胺2A受体基因的克隆和表达分析
3.1 材料和方法
3.1.1 实验材料
3.1.1.1 实验所用厚壳贻贝成贝和幼虫
3.1.1.2 实验仪器
3.1.1.3 实验试剂及耗材
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 厚壳贻贝各组织及发育阶段总RNA的提取及c DNA第一链的合成
3.1.2.2 α_2AR 和 5HT2A 基因片段扩增、克隆和测序
3.1.2.3 序列分析
3.1.2.4 荧光定量 PCR(RT-q PCR)
3.1.2.5 数据分析
3.2 结果
3.2.1 α_2AR基因全长c DNA序列特征和系统进化分析
3.2.2 厚壳贻贝5-HT2AR基因全长序列及其分析
3.2.3 α_2AR基因和5-HT2AR基因在成体各组织的表达分析
3.2.4 α_2AR基因和5-HT2AR基因在厚壳贻贝不同发育阶段的表达分析
3.3 讨论
第四章 α_2肾上腺素受体基因在厚壳贻贝幼虫变态中的作用
4.1 实验材料
4.1.1 厚壳贻贝幼虫
4.2 实验方法
4.2.1 siRNA合成
4.2.2 siRNA电转染厚壳贻贝眼点幼虫
4.2.3 荧光定量PCR检测α_2AR基因变化
4.2.4 眼点幼虫变态实验
4.2.5 眼点幼虫存活率实验
4.2.6 数据处理
4.3 实验结果
4.3.1 siRNA电穿孔转染效果
4.3.2 幼虫变态
4.3.3 幼虫存活率
4.4 讨论
小结
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]厚壳贻贝Wnt4基因时空表达[J]. 徐跃峰,李一峰,梁箫,陈芋如,杨金龙. 水产学报. 2016(10)
[2]胆碱受体化合物对厚壳贻贝幼虫变态的调控作用[J]. 杨金龙,陈芋如,郭行磐,李一峰,徐灿,李家乐. 水产学报. 2014(12)
[3]厚壳贻贝胚胎和早期幼虫神经系统发育的初步研究[J]. 杨金龙,李树恒,刘志伟,李无霜,梁箫,陈芋茹,徐灿,李家乐. 水产学报. 2013(04)
[4]蛋白组氨酸磷酸酶研究进展[J]. 马瑞欣,耿美玉,李晋萍. 生物化学与生物物理进展. 2005(12)
[5]几种神经活性物质对海湾扇贝幼虫变态诱导作用的研究[J]. 刘保忠,张福绥,何义朝. 海洋学报(中文版). 1998(05)
[6]几种生化信号物质对双壳类催产效应的研究[J]. 刘洪军,相建海. 海洋科学. 1994(06)
本文编号：3632040
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 海洋无脊椎动物变态发育相关分子机制研究
1.1 海洋无脊椎动物变态发育
1.1.1 什么是变态
1.1.2 海洋无脊椎动物幼虫的变态
1.1.3 海洋幼虫的变态和发育
1.2 海洋无脊椎动物的变态分子机制
1.2.1 模式生物:果蝇
1.2.2 两栖动物:青蛙
1.2.3 脊索动物:海鞘
1.2.4 节肢动物门:藤壶
1.3 肾上腺素受体和五羟色胺受体在附着变态中的调控作用
1.3.1 肾上腺素受体在附着变态中的调控作用
1.3.2 5 -羟色胺受体在附着变态中的调控作用
1.4 本研究目的、意义及研究思路
1.4.1 研究目的与意义
1.4.2 科学问题
1.4.3 预期成果
1.4.4 技术路线
第二章 肾上腺素诱导厚壳贻贝幼虫变态前后蛋白质组差异分析
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 幼虫培育与样品采集
2.2.2 Label-free定量的实验流程
2.2.3 PRM定量蛋白质组检测
2.2.4 蛋白质鉴定和定量
2.2.5 差异蛋白的功能分析
2.3 实验结果
2.3.1 蛋白质数据统计分析
2.3.2 差异蛋白分析
2.3.3 通过GO通路和KEGG通路富集分析评估差异表达的蛋白质
2.3.4 通过PRM验证差异表达的蛋白质
2.4 讨论
第三章 厚壳贻贝α_2肾上腺素受体和五羟色胺2A受体基因的克隆和表达分析
3.1 材料和方法
3.1.1 实验材料
3.1.1.1 实验所用厚壳贻贝成贝和幼虫
3.1.1.2 实验仪器
3.1.1.3 实验试剂及耗材
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 厚壳贻贝各组织及发育阶段总RNA的提取及c DNA第一链的合成
3.1.2.2 α_2AR 和 5HT2A 基因片段扩增、克隆和测序
3.1.2.3 序列分析
3.1.2.4 荧光定量 PCR(RT-q PCR)
3.1.2.5 数据分析
3.2 结果
3.2.1 α_2AR基因全长c DNA序列特征和系统进化分析
3.2.2 厚壳贻贝5-HT2AR基因全长序列及其分析
3.2.3 α_2AR基因和5-HT2AR基因在成体各组织的表达分析
3.2.4 α_2AR基因和5-HT2AR基因在厚壳贻贝不同发育阶段的表达分析
3.3 讨论
第四章 α_2肾上腺素受体基因在厚壳贻贝幼虫变态中的作用
4.1 实验材料
4.1.1 厚壳贻贝幼虫
4.2 实验方法
4.2.1 siRNA合成
4.2.2 siRNA电转染厚壳贻贝眼点幼虫
4.2.3 荧光定量PCR检测α_2AR基因变化
4.2.4 眼点幼虫变态实验
4.2.5 眼点幼虫存活率实验
4.2.6 数据处理
4.3 实验结果
4.3.1 siRNA电穿孔转染效果
4.3.2 幼虫变态
4.3.3 幼虫存活率
4.4 讨论
小结
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]厚壳贻贝Wnt4基因时空表达[J]. 徐跃峰,李一峰,梁箫,陈芋如,杨金龙. 水产学报. 2016(10)
[2]胆碱受体化合物对厚壳贻贝幼虫变态的调控作用[J]. 杨金龙,陈芋如,郭行磐,李一峰,徐灿,李家乐. 水产学报. 2014(12)
[3]厚壳贻贝胚胎和早期幼虫神经系统发育的初步研究[J]. 杨金龙,李树恒,刘志伟,李无霜,梁箫,陈芋茹,徐灿,李家乐. 水产学报. 2013(04)
[4]蛋白组氨酸磷酸酶研究进展[J]. 马瑞欣,耿美玉,李晋萍. 生物化学与生物物理进展. 2005(12)
[5]几种神经活性物质对海湾扇贝幼虫变态诱导作用的研究[J]. 刘保忠,张福绥,何义朝. 海洋学报(中文版). 1998(05)
[6]几种生化信号物质对双壳类催产效应的研究[J]. 刘洪军,相建海. 海洋科学. 1994(06)
本文编号：3632040
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