海洋细菌HQM9T的鉴定及其琼胶酶研究

发布时间：2022-02-20 22:10

　　琼胶酶是一种能够降解琼胶,生成琼胶寡糖的糖苷水解酶。近年来,随着糖生物学的深入研究,人们发现琼胶寡糖尤其是新琼寡糖在诱导细胞调亡、抗氧化、抗炎、促进双歧杆菌生长、预防糖尿病等方面具有显著的生理活性,因此可广泛应用在食品、饲料、化妆品和医药领域。琼胶寡糖制备方面,传统的化学酸解法方法存在着反应条件难控制、降解产物不纯等问题,而酶解法则有底物专一性强、产物特异性高、反应条件温和等优点,因此对琼胶酶的研究具有重要意义。本文以本实验室分离得到的海洋细菌HQM9T为主要研究对象,完成了其新种鉴定、发酵产酶条件优化以及琼胶酶基因的克隆表达等工作。海洋细菌HQM9T分离自生长在威海海域的收集的石花菜表面,是一株具有很强琼胶降解能力细菌,在2216E平板上培养3-5天可完全液化平板。HQM9T的呼吸醌类型是MK-6,主要脂肪酸类型是C15:0ISO, C17:0iSO3OH, C16:1w7c/15iSO2OH, C16:03OH, C16:0, C17:02OH, C14:0, C13:1AT12-13, C13:0iso.主要的极性脂包括磷脂酰乙醇胺和一种未知的脂质。基因组DNA（G+C）含量是3... 

【文章来源】：山东大学山东省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略词
第一章 绪论
    1.1 琼胶
    1.2 琼胶酶
        1.2.1 琼胶酶的来源
        1.2.2 琼胶酶在糖苷水解酶家族中的分类
        1.2.3 琼胶酶活性的检测方法
        1.2.4 琼胶酶的应用
        1.2.5 琼胶酶的研究进展
    1.3 本论文研究的立题依据
第二章 海洋细菌新种—噬琼胶海水菌(Aquimarina agarivorans sp.nov)HQM9~T的鉴定及发酵产酶条件优化
    2.1 实验材料和仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验菌株
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 菌株生理生化鉴定
        2.2.2 菌株API快速鉴定
        2.2.3 细菌脂肪酸含量测定
        2.2.4 细菌极性脂分析
        2.2.5 细菌醌型分析
        2.2.6 菌株保藏
        2.2.7 菌株HQM9~T产酶发酵条件优化
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 菌株HQM9~T的生理生化特征
        2.3.2 菌株HQM9~T的脂肪酸含量
        2.3.3 菌株HQM9~T醌型及极性脂分析
        2.3.4 菌株HQM9~T产琼胶酶发酵条件的正交实验结果
        2.3.5 优化后菌株HQM9~T琼胶酶的发酵进程曲线测定
    2.4 讨论
第三章 海洋细菌HQM9~T基因组测序结果分析与胞外琼胶酶谱质谱鉴定
    3.1 实验材料和仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验菌株
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 种子液的制备
        3.2.2 菌株HQM9~T粗酶液的制备
        3.2.3 不同时间琼胶酶琼胶酶组分的变化情况
        3.2.4 活性电泳检测粗酶液琼胶酶组分
        3.2.5 菌株HQM9~T基因组的提取
        3.2.6 菌株HQM9~T基因组测序和分析
        3.2.7 琼胶酶基因的虚拟酶切与质谱鉴定结果比较
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 不同碳源诱导下的菌株HQM9~T的胞外琼胶酶
        3.3.2 质谱鉴定结果
        3.3.3 菌株HQM9~T基因组测序结果分析
        3.3.4 菌株HQM9~T琼胶酶基因的虚拟酶切与质谱鉴定比较
    3.4 讨论
第四章 菌株HQM9~T琼胶酶基因的克隆与表达
    4.1 实验材料与仪器
        4.1.1 培养基
        4.1.2 实验菌株和质粒
        4.1.3 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 琼胶酶基因的生物信息学分析
        4.2.2 琼胶酶基因的克隆
        4.2.3 其它基因的pMAL融合表达
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 琼胶酶基因的生物信息学分析
        4.3.2 琼胶酶基因的扩增
        4.3.3 基因和载体的双酶切
        4.3.4 SDS-PAGE检测琼胶酶基因的表达情况
        4.3.5 重组酶的活性检测
        4.3.6 重组酶Aga16AD的纯化
        4.3.7 重组酶酶学性质研究
        4.3.8 其它基因的pMAL融合表达
    4.4 讨论
总结
参考文献
致谢
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附录
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
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[5]用海藻细胞工程技术,发展我国的海水养殖业[J]. 戴继勋.  世界科技研究与发展. 2002(03)
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本文编号：3635903