水产品中恩诺沙星残留胶体金免疫层析检测技术的建立及应用
发布时间：2022-04-27 21:45
水产品中兽药残留问题日益突出，兽药虽在养殖过程中带来不少作用，但摄入人体后对人体危害大，严格把控水产品中的兽药残留就显得尤为重要。恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）是第三代喹诺酮类药物，由于其在组织液中浓度达到最高值速度快、组织分布范围广、抑菌的数量和种类多等诸多优点，且其代谢产物均有良好的抗菌作用，所以广泛应用于水产养殖中的疾病防治。由于部分养殖户存在不规范用药，容易导致恩诺沙星随着食物链进入人体，造成软骨组织、中枢神经、消化系统等方面的损伤，同时较大剂量还会造成神经系统的迟缓、肝脏损伤及皮肤过敏等个方面的问题。本文通过采用胶体金免疫检测法，研究适用于现场快速监测水产品中ENR残留的检测体系。胶体金免疫层析法具有检测速度快、检测结果准确等优点，非常适用于这类现场快速检测。本次研究主要获得以下结果：1．ENR-OVA人工抗原的合成。采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将ENR偶联到OVA上，经FPLC、紫外、SDS-PAGE电泳等的检测分析，ENR与OVA偶联成功，可以用于进一步试验；2．多克隆抗体的制备。利用人工合成的抗原ENR-OVA免疫新西兰大白兔，抗血清经饱和硫酸铵法纯化后...
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
图清单
表清单
缩写词表
第1章 前言
1.1 在水产品中渔药的残留概述
1.2 恩诺沙星在水产品中的应用现状
1.2.1 恩诺沙星简介
1.2.2 恩诺沙星的理化特性
1.2.3 恩诺沙星的抗菌作用
1.2.4 恩诺沙星不良反应
1.3 恩诺沙星检测方法研究进展
1.3.1 微生物检测法
1.3.2 高效液相色谱法
1.3.3 液相色谱与质谱联用技术
1.3.4 毛细管电泳分析法
1.3.5 化学发光免疫分析技术
1.3.6 酶联免疫吸附测定法
1.3.7 胶体金免疫层析法
1.4 胶体金免疫层析法
1.4.1 胶体金的制备
1.4.2 胶体金标记抗体制备
1.5 研究的目的和意义
第2章 恩诺沙星人工抗原合成与鉴定
2.1 材料和方法
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.1.3 人工抗原合成
2.1.4 合成产物鉴定
2.2 结果与分析
2.2.1 人工抗原 FPLC 层析分离纯化鉴定
2.2.2 人工抗原紫外扫描鉴定
2.2.3 人工抗原的 SDS-PAGE 鉴定
2.3 小结与讨论
第3章 恩诺沙星多克隆抗体的制备和鉴定
3.1 材料和设备
3.1.1 主要实验材料
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 主要缓冲液的配制
3.2 抗体制备与评价
3.2.1 动物免疫方案
3.2.2 抗体效价测定
3.2.3 包被抗原与抗恩诺沙星抗体最适工作浓度确定
3.2.4 标准曲线绘制与抗体亲和力测定
3.3 结果与分析
3.3.1 抗体效价鉴定
3.3.2 包被抗原与抗恩诺沙星抗体最适工作浓度确定
3.3.3 标准曲线绘制与亲和性分析
3.4 小结与讨论
第4章 恩诺沙星胶体金免疫层析检测技术研究
4.1 材料和方法
4.1.1 主要试剂
4.1.2 主要仪器
4.1.3 主要缓冲液与标准品溶液的配制
4.1.4 实验样本材料
4.1.5 实验方法
4.2 结果与分析
4.2.1 金标 ENR 抗体质量的鉴定
4.2.2 金标抗体喷膜量的选择
4.2.3 NC 膜的选择
4.2.4 NC 膜抗原包被量的选择
4.2.5 最低检测限
4.2.6 特异性检测
4.2.7 水产品样本添加及 ELISA 比对结果
4.2.8 常温保存期和保存期加速结果
4.2.9 实际样本检测
4.3 小结与讨论
第5章 结论
5.1 人工抗原合成及多克隆抗体制备
5.2 ENR 沙星试纸条研制及生产工艺确定
5.3 本次研制试纸条的优劣
5.3.1 优势
5.3.2 不足
5.4 结语
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
本文编号：3649210
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
图清单
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第1章 前言
1.1 在水产品中渔药的残留概述
1.2 恩诺沙星在水产品中的应用现状
1.2.1 恩诺沙星简介
1.2.2 恩诺沙星的理化特性
1.2.3 恩诺沙星的抗菌作用
1.2.4 恩诺沙星不良反应
1.3 恩诺沙星检测方法研究进展
1.3.1 微生物检测法
1.3.2 高效液相色谱法
1.3.3 液相色谱与质谱联用技术
1.3.4 毛细管电泳分析法
1.3.5 化学发光免疫分析技术
1.3.6 酶联免疫吸附测定法
1.3.7 胶体金免疫层析法
1.4 胶体金免疫层析法
1.4.1 胶体金的制备
1.4.2 胶体金标记抗体制备
1.5 研究的目的和意义
第2章 恩诺沙星人工抗原合成与鉴定
2.1 材料和方法
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.1.3 人工抗原合成
2.1.4 合成产物鉴定
2.2 结果与分析
2.2.1 人工抗原 FPLC 层析分离纯化鉴定
2.2.2 人工抗原紫外扫描鉴定
2.2.3 人工抗原的 SDS-PAGE 鉴定
2.3 小结与讨论
第3章 恩诺沙星多克隆抗体的制备和鉴定
3.1 材料和设备
3.1.1 主要实验材料
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 主要缓冲液的配制
3.2 抗体制备与评价
3.2.1 动物免疫方案
3.2.2 抗体效价测定
3.2.3 包被抗原与抗恩诺沙星抗体最适工作浓度确定
3.2.4 标准曲线绘制与抗体亲和力测定
3.3 结果与分析
3.3.1 抗体效价鉴定
3.3.2 包被抗原与抗恩诺沙星抗体最适工作浓度确定
3.3.3 标准曲线绘制与亲和性分析
3.4 小结与讨论
第4章 恩诺沙星胶体金免疫层析检测技术研究
4.1 材料和方法
4.1.1 主要试剂
4.1.2 主要仪器
4.1.3 主要缓冲液与标准品溶液的配制
4.1.4 实验样本材料
4.1.5 实验方法
4.2 结果与分析
4.2.1 金标 ENR 抗体质量的鉴定
4.2.2 金标抗体喷膜量的选择
4.2.3 NC 膜的选择
4.2.4 NC 膜抗原包被量的选择
4.2.5 最低检测限
4.2.6 特异性检测
4.2.7 水产品样本添加及 ELISA 比对结果
4.2.8 常温保存期和保存期加速结果
4.2.9 实际样本检测
4.3 小结与讨论
第5章 结论
5.1 人工抗原合成及多克隆抗体制备
5.2 ENR 沙星试纸条研制及生产工艺确定
5.3 本次研制试纸条的优劣
5.3.1 优势
5.3.2 不足
5.4 结语
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
本文编号：3649210
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