乌鳢性别相关的Dmrt基因的克隆及其组织表达特征

发布时间：2022-07-29 18:08

　　近年来随着养殖业的需要，乌鳢（Channa argu）逐渐成为国内的特种养殖品种。为提高乌鳢子代雄性率及开展乌鳢的单性养殖，本研究采用RT-PCR和RACE的方法克隆出了乌鳢的Dmrt1基因和Dmrt4的部分基因，并对Dmrt1的表达特性进行了具体的分析，这将有助于了解乌鳢的性别决定机制。Dmrt基因是涉及到性别决定和分化的保守基因家族，它广泛存在于不同物种中。本研究通过使用简并引物从乌鳢的基因组DNA中获得了Dmrt1的保守域DM1及Dmrt4的保守域DM4，对DM结构域进行测序，通过比对确定为Dmrt基因的保守域。根据获得的保守域序列，设计3’RACE和5’RACE的引物，采用RACE的方法扩增Dmrt的全长cDNA。在乌鳢的精巢组织克隆得到乌鳢Dmrt1基因的cDNA序列，并采用半定量和定量的手段对Dmrt1mRNA在乌鳢成鱼中不同组织的表达差异进行分析。研究获得的乌鳢Dmrt1基因cDNA全长为1573bp，5’端非翻译区25bp，编码266个氨基酸的800bp的开放阅读框，747bp含有脊椎动物典型的多腺苷酸化加尾信号AATAAA的3’端非翻译区。通过对氨基酸序列的同源性进行... 

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1 乌鳢的养殖情况和其研究意义
    2 鱼类的性别决定
        2.1 鱼类的性别及性染色体
        2.2 鱼类性别决定相关因素
    3 Dmrt 基因的研究现状
        3.1 Dmrt 基因的发现
        3.2 鱼类 Dmrt 基因的研究现状
    4 本论文的研究意义
        4.1 理论意义
        4.2 生产意义
第2章 实验材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验用鱼
        1.2 实验药品与仪器
            1.2.1 主要实验仪器
            1.2.2 主要实验药品和配制方法
        1.3 引物设计与合成
            1.3.1 DM 区的引物
            1.3.2 3′RACE 引物
            1.3.3 5′RACE 引物
            1.3.4 验证 Dmrt1 全长的引物
            1.3.5 用于定量分析的引物
    2 实验方法
        2.1 乌鳢基因组 DNA 的提取
        2.2 乌鳢精巢总 RNA 的提取
        2.3 琼脂糖凝胶电泳
        2.4 琼脂糖凝胶中回收 DNA
        2.5 PCR 扩增 DM 结构域
        2.6 乌鳢总 RNA 的反转录
        2.7 3′RACE 扩增 Dmrt 的 3′端
        2.8 5′RACE 扩增 Dmrt 的 5′端
        2.9 PCR 产物的连接反应
        2.10 重组质粒的筛选
        2.11 菌种的保存
第3章 实验结果
    1 乌鳢基因组 DNA 的提取
    2 乌鳢精巢总 RNA 的提取
    3 DM-domain 区的扩增
    4 Dmrt1 基因的序列分析
        4.1 Dmrt1 保守域的比对
        4.2 乌鳢Dmrt1基因的3′RACE和5′RACE
        4.3 乌鳢 Dmrt1 氨基酸的同源性分析
        4.4 乌鳢 Dmrt1 系统树的分析
        4.5 Dmrt1 基因在成体乌鳢不同组织的表达
    5 Dmrt4 基因的序列分析
        5.1 Dmrt4 保守域的对比
        5.2 乌鳢 Dmrt4 基因的 5′RACE
第4章 讨论
    1 乌鳢 Dmrt1 基因结构、表达
    2 乌鳢 Dmrt4 基因结构
    3 Dmrt 家族的特点
    4 系统发育树的构建
结语
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3666929