罗非鱼补体C3的克隆及无乳链球菌C5a肽酶免疫前后的组织表达分析

发布时间：2022-07-29 16:46

　　近年来,罗非鱼链球菌病严重危害我国罗非鱼养殖产业,目前尚无有效防治措施。通过疫苗预防是一种可行办法。本实验室前期的研究发现,无乳链球菌C5a肽酶（Scp B）蛋白免疫罗非鱼后,能显著提高罗非鱼对无乳链球菌的抵抗力,且能增强其非特异免疫能力。补体C3是连接特异性免疫和非特异免疫的桥梁,通过克隆罗非鱼补体C3基因,并了解其在Scp B免疫前后的组织表达特点,可为进一步研究Scp B蛋白抗无乳链球菌感染的作用机制奠定基础。补体C3（Complement component C3）是补体系统的中心效应分子,在鱼类抗病原感染中发挥重要作用。为研究罗非鱼补体C3在抗无乳链球菌感染中的作用,本实验克隆了罗非鱼补体C3基因,并对其氨基酸序列、理化特性及组织表达特点进行了分析。结果显示,罗非鱼补体C3基因c DNA序列（Gen Bank登录号:KU977109）为6994bp,ORF区全长5361bp,共编码1786个氨基酸;通过电子克隆获得罗非鱼补体C3基因组DNA 32250bp,包含外显子44个和内含子43个。罗非鱼补体C3蛋白分子量为200.14k Da,等电点为7.11,为疏水性蛋白;补体C3... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
引言
    1 补体C3研究进展
    2 罗非鱼链球菌病疫苗的研究进展
        2.1 灭活疫苗
        2.2 弱毒疫苗
        2.3 基因工程亚单位疫苗
        2.4 DNA疫苗
    3 无乳链球菌C5a肽酶（Scp B）研究进展
    4. 本研究的目的意义及技术路线
第一章 尼罗罗非鱼补体C3基因的克隆及序列分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验鱼
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验方法
            1.2.1 引物设计
            1.2.2 尼罗罗非鱼组织总RNA提取
            1.2.3 cDNA合成
            1.2.4 补体C3基因的c DNA克隆及验证
            1.2.5 PCR产物琼脂糖凝胶回收
            1.2.6 PCR纯化产物的克隆
            1.2.7 连接产物的转化
            1.2.8 阳性菌落检测及测序
            1.2.9 补体C3序列分析
            1.2.10 补体C3氨基酸序列同源性比较
    2 结果
        2.1 尼罗罗非鱼组织总RNA的提取
        2.2 补体C3基因的c DNA克隆
        2.3 同源比较和系统进化分析
    3 讨论
第二章 Scp B免疫及GBS人工感染前后的罗非鱼补体C3的组织表达分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验鱼及免疫蛋白
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验方法
            1.2.1 Scp B蛋白的诱导表达及包涵体复性
            1.2.2 重组蛋白纯化
            1.2.3 Scp B蛋白的Western blot分析
            1.2.4 Scp B蛋白疫苗制备
            1.2.5 罗非鱼补体C3基因组织表达分析
            1.2.6 Scp B免疫及GBS人工感染后的组织表达分析
    2 结果
        2.1 Scp B蛋白疫苗制备
        2.2 健康尼罗罗非鱼补体C3基因的组织表达
        2.3 Scp B免疫及GBS人工感染后的组织表达分析
    3 讨论
第三章 补体C3肝脏组织定位分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验用鱼
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验方法
            1.2.1 RNA探针制备
            1.2.2 组织包埋与冷冻切片
            1.2.3 原位杂交实验
    2 结果
        2.1 RNA探针构建
        2.2 补体C3基因在肝脏组织定位分析
    3 讨论
全文总结
参考文献
附录一 缩略词表
附录二 在研期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[8]文昌鱼和斑马鱼C1q、C3及G10的进化分析及基因表达的研究[D]. 张宁.山东大学 2009
[9]海豚链球菌（Streptococcus iniae）疫苗对淡、海水养殖鱼类的保护性试验[D]. 张生.西南大学 2007



本文编号：3666816