半滑舌鳎StAR基因的克隆和表达分析及性别相关基因（FTZ-F1、neurl3）原位杂交分析

发布时间：2022-09-28 13:37

　　半滑舌鳎是我国一种重要的海水养殖鱼类，由于半滑舌鳎营养价值丰富，具有广阔的养殖前景。并且在发育过程中，半滑舌鳎雌雄差异大，在自然条件下容易发生性逆转。因此，研究半滑舌鳎性别控制的相关基因决定机制是一个十分重要的研究方向。本文通过对半滑舌鳎StAR基因的克隆，发现该基因在半滑舌鳎精巢的表达量明显，推测该基因对精巢的发育和精细胞的发生有密切关系，对半滑舌鳎在性别相关基因的挖掘工作做了很好的基础性工作，为进一步研究性别相关基因提供基础性材料。 利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列，设计RACE引物，克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列全长为1294bp，5′端UTR为132bp,3′端UTR为310bp，开放阅读框（ORF）为852bp，共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析，结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85℅，和虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81℅、83℅和76℅。StAR基因的雌、雄鱼不同组织表达分析表明，StAR基因在雄鱼性腺中高表达，在雄鱼的肝脏、脑及... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
第一章 文章综述
    1 鱼类性别决定研究进展
        1.1 性染色体的类型
        1.2 性别决定
            1.2.1 环境决定
            1.2.2 性激素的定向诱导
            1.2.3 性别决定基因
            1.2.4 环境内分泌干扰物对鱼类性别的影响
    2.鱼类性腺的发育过程
        2.1 鱼类生殖细胞的发育
        2.2 鱼类性腺的发育和分化
    3.StAR 基因、FTZ-F1 基因、neurl3 基因的研究进展
        3.1 StAR 基因的研究进展
        3.2 FTZ-F1 基因的研究进展
        3.3 E3 基因的研究进展
    4.原位杂交技术的研究进展
        4.1 原位杂交技术在水产动物中的研究进展
第二章 半滑舌鳎性腺发育过程的组织学观察
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验耗材与实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 不同时期的幼鱼的 DNA 的提取过程：
            2.2.2 利用微卫星标记的 SCAR 标记进行性别鉴定
            2.2.3 性腺的组织切片
    3.结果与讨论
        3.1 遗传性别的鉴定结果
        3.2 鱼类性腺分化过程的组织学观察
    4 讨论
第三章 半滑舌鳎 StAR 基因克隆及表达分析
    1 引言
    2 实验材料和试剂
        2.1 实验材料
        2.2 实验试剂
    3 实验方法
        3.1 基因组 DNA 的提取、总 RNA 的提取、cDNA 的合成
            3.1.1 基因组 DNA 的提取
            3.1.2 总 RNA 的提取
            3.1.3 cDNA 的合成
        3.2 半滑舌鳎 StAR 基因的全长 cDNA 的克隆及序列分析
            3.2.1 StAR 基因的全长 cDNA 的克隆
            3.2.2 序列分析和拼接
            3.2.3 基因的 RT-PCR 分析和荧光定量 PCR 分析
            3.2.4 StAR 基因的原位杂交分析
    4 实验结果
        4.1 半滑舌鳎 StAR 基因 cDNA 全长克隆及序列分析
        4.2 StAR 基因序列分析及进化树构建
        4.3 半滑舌鳎 StAR 基因的 cDNA 序列全长分析
        4.4 半滑舌鳎 StAR 基因的组织分布
        4.5 半滑舌鳎 StAR 基因的定量表达分析
        4.6 原位杂交结果
    5 讨论
第四章 半滑舌鳎 FTZ-F1，neurl3 基因的时空表达分析
    1 前言
    2.实验材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
            2.2.1 探针的制备
            2.2.2 原位杂交过程
    3 实验结果
        3.1 FTZ-F1 基因的原位杂交结果分析
        3.2 neurl3 基因的原位杂交结果分析
    4.讨论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]青鳉（Oryzias latipes）性腺分化与发育的组织学观察[J]. 张静,黄进强,李亚亚,王娜,孙建,王天姿,陈松林.  动物学研究. 2013(05)
[2]水温对半滑舌鳎性腺组织发育的影响[J]. 汪娣,田永胜,陈松林.  水产学报. 2012(02)
[3]半滑舌鳎三倍体鱼苗的人工诱导与鉴定[J]. 陈松林,李文龙,季相山,谢明树,徐营,邓寒.  水产学报. 2011(06)
[4]半滑舌鳎养殖群体中自然性逆转伪雄鱼的发现[J]. 季相山,陈松林,马洪雨,姜运良,杨景峰,董晓丽.  水产学报. 2010(02)
[5]西伯利亚鲟性腺早期发生、分化、发育的组织学观察[J]. 田美平,庄平,张涛,颜世伟,章龙珍,刘婷.  中国水产科学. 2010(03)
[6]黄颡鱼性腺分化的组织学观察[J]. 尹洪滨,贾中贺,姚道霞,孙中武,于波,孙德志.  动物学杂志. 2008(06)
[7]奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆及其表达[J]. 唐永凯,李建林,陈文华,俞菊华.  中国水产科学. 2008(05)
[8]原位杂交技术在斜带石斑鱼神经坏死病毒检测中的应用[J]. 陈晓艳,何建国.  海洋科学. 2008(06)
[9]半滑舌鳎脑芳香化酶基因cDNA克隆及表达分析[J]. 邓思平,陈松林,刘本伟,徐建勇,田永胜.  动物学研究. 2008(01)
[10]StARmRNA在仔猪睾丸组织中的表达研究[J]. 詹晓庆,王鲜忠,孙燕,王满意,张家骅.  中国生物工程杂志. 2007(03)

博士论文
[1]牙鲆雌核发育分析鉴定与性别决定机制研究[D]. 徐成.中国科学院海洋研究所 2000



本文编号：3681762