桃拉综合征病毒的环介导等温扩增联合横向流动试纸条（LAMP-LFD）检测方法的建立

发布时间：2022-10-15 21:03

　　桃拉综合征病毒（Taura syndrome virus, TSV）是威胁虾类养殖业的主要病毒之一。本试验建立了一种快速检测TSV的环介导等温扩增联合横向流动试纸条（LAMP-LFD）方法,并与荧光定量PCR（qPCR）进行了对比。基于TSV的衣壳蛋白VP2核酸序列,设计3对特异性引物（外引物:FIP/BIP,内引物:F3/B3,环引物:LF/LB）,进行LAMP反应体系的优化。其中引物LF以BIO标记,LB以FAM标记,用于横向流动试纸条（LFD）的检测。结果表明:LAMP最佳反应可在63℃恒温条件下40 min内完成。整个扩增反应到LFD结果判定可在45 min内完成。LAMP-LFD可特异性检出TSV特异性片段,未与其它病毒和细菌发生交叉反应,且其检测限为22.9 fg。与qPCR相比,本研究所建立的LAMP-LFD检测体系虽然检测限高于qPCR 10倍,但比qPCR检测时间缩短近1 h,且LAMP-LFD特异性强、操作简单,无需特殊仪器设备,可快捷、方便地检测出TSV,满足TSV基层快速检测的需要。 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂
    1.2 引物的设计
    1.3 LAMP反应体系和条件
    1.4 LAMP反应参数的优化
    1.5 荧光定量PCR(qPCR)反应
    1.6 LAMP产物的LFD检测
    1.7 特异性评价
    1.8 灵敏度评价
    1.9 临床实际样品检测
2 结果与分析
    2.1 LAMP体系的优化
    2.2 LAMP-LFD特异性分析
    2.3 LAMP-LFD灵敏度分析
    2.4 实际样品检测
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3692035