团头鲂干细胞相关因子nanog和oct4的鉴定
发布时间：2022-10-22 17:42
团头鲂（Megalobrama amblycephala）是我国主要的淡水养殖鱼类之一,具有重要的经济价值和科学研究意义。目前有关团头鲂的研究涉及基础生物学、遗传育种、营养与饲料、疾病与免疫、基因克隆与表达以及基因组学等多个方面,但对于团头鲂干细胞多能性相关因子的基础研究数据缺乏。作为具有代表性的干细胞因子,nanog和oct4已被证明在哺乳动物和部分硬骨鱼类早期胚胎发育阶段以及维持干细胞自我更新和分化方面起着举足轻重的作用,而鱼类nanog和oct4的结构、表达与功能同哺乳类相比有何特点尚不明确。本研究以团头鲂为实验对象,采用多种分子生物学和发育生物学实验技术,结合CRISPR/Cas9基因敲除等手段,初步阐明了团头鲂nanog（Mananog）和oct4（Maoct4）基因的结构特点、表达模式和部分生物学功能。研究结果表明Mananog和Maoct4均具有母源性表达的特征,其表达模式区别于哺乳动物Nanog和Oct4的表达模式;通过原核表达蛋白能够制备出兔抗团头鲂Nanog和Oct4特异性抗体;证明了Mananog和Maoct4可以跨物种作用于人肝癌细胞HepG2,提高其增殖能力、...
【文章页数】：173 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1.1 Nanog基因研究进展
1.1.1 Nanog基因的结构
1.1.2 Nanog基因的表达与定位
1.1.3 Nanog基因的调节通路
1.1.4 Nanog基因的功能
1.2 Oct4基因研究进展
1.2.1 Oct4基因的结构
1.2.2 Oct4基因的表达与定位
1.2.3 Oct4基因的调节通路
1.2.4 Oct4基因的功能
1.3 本研究的主要内容、目的和意义
第二章 团头鲂nanog基因的克隆、表达与功能鉴定
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 RNA提取、nanog基因的cDNA序列克隆
2.2.3 DNA提取、nanog基因的基因组DNA序列克隆
2.2.4 nanog基因的异构体序列克隆
2.2.5 nanog基因序列分析、多序列比对与进化树构建方法
2.2.6 nanog基因表达模式的RT-PCR和原位杂交分析方法
2.2.7 nanog基因在细胞中的核定位分析方法
2.2.8 Nanog抗体的制备与验证方法
2.2.9 nanog等外源干细胞相关因子过表达对HepG2细胞的影响
2.2.10 斑马鱼nanog基因敲除与挽救对其胚胎表型和PGC的影响
2.3 结果
2.3.1 nanog基因序列克隆结果
2.3.2 nanog基因氨基酸序列同源性及系统进化树分析结果
2.3.3 nanog基因的时空表达模式分析结果
2.3.4 nanog基因在细胞中的核定位分析结果
2.3.5 Nanog蛋白多克隆抗体的制备与验证结果
2.3.6 nanog及多因子过表达对HepG2细胞的影响分析结果
2.3.7 斑马鱼nanog基因敲除与挽救对斑马鱼的影响分析结果
2.4 讨论
第三章 团头鲂oct4基因的克隆、表达与功能鉴定
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 oct4基因克隆与序列分析方法
3.2.3 oct4基因的时空表达模式分析方法
3.2.4 oct4基因在细胞中的核定位分析方法
3.2.5 Oct4抗体的制备与验证方法
3.2.6 oct4基因过表达对HepG2细胞的影响分析方法
3.3 结果
3.3.1 oct4基因的序列特征
3.3.2 oct4基因氨基酸序列同源性及系统进化树分析结果
3.3.3 oct4基因的时空表达模式分析结果
3.3.4 oct4基因在细胞中的核定位分析结果
3.3.5 Oct4蛋白多克隆抗体的制备与验证结果
3.3.6 oct4基因过表达对HepG2细胞的影响分析结果
3.4 讨论
本论文主要研究结果及创新点
参考文献
附录
附录一：文中所用相关图片与部分试剂配制方法
附录二：在读期间研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用[J]. 李玲玉,方健,于淼,陈天圣. 水生生物学报. 2017(04)
[2]太平洋鳕神经坏死病毒衣壳蛋白（CP）的原核表达及条件优化[J]. 毛明光,温施慧,姜志强,蒋洁兰,孙航,吕绘倩,李幸. 大连海洋大学学报. 2016(02)
[3]团头鲂白细胞介素6基因启动子报告载体的构建及活性分析[J]. 扶晓琴,丁祝进,饶友亮,王卫民,刘红. 华中农业大学学报. 2016(01)
[4]猪转录因子Nanog高效表达、多克隆抗体制备及其应用[J]. 王传振,刘晓鹏,崔怡,王华岩. 农业生物技术学报. 2016(01)
[5]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展[J]. 刘志国. 畜牧兽医学报. 2014(10)
[6]团头鲂种质资源及遗传改良研究进展[J]. 高泽霞,王卫民,蒋恩明,陈柏湘. 华中农业大学学报. 2014(03)
[7]肌醇对氨氮应激下团头鲂幼鱼免疫的影响[J]. 崔红红,刘波,戈贤平,廖英杰,谢骏,任鸣春,周群兰,缪凌鸿,陈汝丽. 水产学报. 2014(02)
[8]CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇. 生物化学与生物物理进展. 2013(08)
[9]八聚体结合转录因子4调控细胞应激反应的研究进展[J]. 黄蓉,韦曦. 国际口腔医学杂志. 2013(04)
[10]多能干细胞核心调控基因Nanog介导生殖母细胞减数分裂的作用研究[J]. 王璐,王亚平,姜蓉,彭彦. 解放军医学杂志. 2012(07)
博士论文
[1]牙鲆（Paralichthys olivaceus）干细胞多能性相关转录因子Oct4、Nanog和Sox2的克隆与分析[D]. 高金宁.中国海洋大学 2014
[2]团头鲂EST-SSR的开发及在育种中的应用[D]. 罗伟.华中农业大学 2014
[3]特定转录因子在哺乳动物生长发育和体细胞重编程过程中的功能研究[D]. 潘传英.西北农林科技大学 2010
[4]稳定表达牛Nanog基因的成纤维细胞制作、多能性分析及转基因克隆胚胎构建[D]. 郑喜邦.西北农林科技大学 2008
硕士论文
[1]尼罗罗非鱼Oct4的表达、多能性活性及转录调控研究[D]. 黄小换.西南大学 2016
[2]团头鲂胚胎发育的转录组分析[D]. 李麒麟.湖南师范大学 2015
[3]Nanog基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备[D]. 李军.西北农林科技大学 2007
本文编号：3696564
【文章页数】：173 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1.1 Nanog基因研究进展
1.1.1 Nanog基因的结构
1.1.2 Nanog基因的表达与定位
1.1.3 Nanog基因的调节通路
1.1.4 Nanog基因的功能
1.2 Oct4基因研究进展
1.2.1 Oct4基因的结构
1.2.2 Oct4基因的表达与定位
1.2.3 Oct4基因的调节通路
1.2.4 Oct4基因的功能
1.3 本研究的主要内容、目的和意义
第二章 团头鲂nanog基因的克隆、表达与功能鉴定
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 RNA提取、nanog基因的cDNA序列克隆
2.2.3 DNA提取、nanog基因的基因组DNA序列克隆
2.2.4 nanog基因的异构体序列克隆
2.2.5 nanog基因序列分析、多序列比对与进化树构建方法
2.2.6 nanog基因表达模式的RT-PCR和原位杂交分析方法
2.2.7 nanog基因在细胞中的核定位分析方法
2.2.8 Nanog抗体的制备与验证方法
2.2.9 nanog等外源干细胞相关因子过表达对HepG2细胞的影响
2.2.10 斑马鱼nanog基因敲除与挽救对其胚胎表型和PGC的影响
2.3 结果
2.3.1 nanog基因序列克隆结果
2.3.2 nanog基因氨基酸序列同源性及系统进化树分析结果
2.3.3 nanog基因的时空表达模式分析结果
2.3.4 nanog基因在细胞中的核定位分析结果
2.3.5 Nanog蛋白多克隆抗体的制备与验证结果
2.3.6 nanog及多因子过表达对HepG2细胞的影响分析结果
2.3.7 斑马鱼nanog基因敲除与挽救对斑马鱼的影响分析结果
2.4 讨论
第三章 团头鲂oct4基因的克隆、表达与功能鉴定
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 oct4基因克隆与序列分析方法
3.2.3 oct4基因的时空表达模式分析方法
3.2.4 oct4基因在细胞中的核定位分析方法
3.2.5 Oct4抗体的制备与验证方法
3.2.6 oct4基因过表达对HepG2细胞的影响分析方法
3.3 结果
3.3.1 oct4基因的序列特征
3.3.2 oct4基因氨基酸序列同源性及系统进化树分析结果
3.3.3 oct4基因的时空表达模式分析结果
3.3.4 oct4基因在细胞中的核定位分析结果
3.3.5 Oct4蛋白多克隆抗体的制备与验证结果
3.3.6 oct4基因过表达对HepG2细胞的影响分析结果
3.4 讨论
本论文主要研究结果及创新点
参考文献
附录
附录一：文中所用相关图片与部分试剂配制方法
附录二：在读期间研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用[J]. 李玲玉,方健,于淼,陈天圣. 水生生物学报. 2017(04)
[2]太平洋鳕神经坏死病毒衣壳蛋白（CP）的原核表达及条件优化[J]. 毛明光,温施慧,姜志强,蒋洁兰,孙航,吕绘倩,李幸. 大连海洋大学学报. 2016(02)
[3]团头鲂白细胞介素6基因启动子报告载体的构建及活性分析[J]. 扶晓琴,丁祝进,饶友亮,王卫民,刘红. 华中农业大学学报. 2016(01)
[4]猪转录因子Nanog高效表达、多克隆抗体制备及其应用[J]. 王传振,刘晓鹏,崔怡,王华岩. 农业生物技术学报. 2016(01)
[5]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展[J]. 刘志国. 畜牧兽医学报. 2014(10)
[6]团头鲂种质资源及遗传改良研究进展[J]. 高泽霞,王卫民,蒋恩明,陈柏湘. 华中农业大学学报. 2014(03)
[7]肌醇对氨氮应激下团头鲂幼鱼免疫的影响[J]. 崔红红,刘波,戈贤平,廖英杰,谢骏,任鸣春,周群兰,缪凌鸿,陈汝丽. 水产学报. 2014(02)
[8]CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇. 生物化学与生物物理进展. 2013(08)
[9]八聚体结合转录因子4调控细胞应激反应的研究进展[J]. 黄蓉,韦曦. 国际口腔医学杂志. 2013(04)
[10]多能干细胞核心调控基因Nanog介导生殖母细胞减数分裂的作用研究[J]. 王璐,王亚平,姜蓉,彭彦. 解放军医学杂志. 2012(07)
博士论文
[1]牙鲆（Paralichthys olivaceus）干细胞多能性相关转录因子Oct4、Nanog和Sox2的克隆与分析[D]. 高金宁.中国海洋大学 2014
[2]团头鲂EST-SSR的开发及在育种中的应用[D]. 罗伟.华中农业大学 2014
[3]特定转录因子在哺乳动物生长发育和体细胞重编程过程中的功能研究[D]. 潘传英.西北农林科技大学 2010
[4]稳定表达牛Nanog基因的成纤维细胞制作、多能性分析及转基因克隆胚胎构建[D]. 郑喜邦.西北农林科技大学 2008
硕士论文
[1]尼罗罗非鱼Oct4的表达、多能性活性及转录调控研究[D]. 黄小换.西南大学 2016
[2]团头鲂胚胎发育的转录组分析[D]. 李麒麟.湖南师范大学 2015
[3]Nanog基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备[D]. 李军.西北农林科技大学 2007
本文编号：3696564
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