Smad核互作蛋白在克氏原鳌虾蜕皮激素信号通路中的功能

发布时间：2022-11-06 08:13

　　蜕皮激素在虾蟹类动物的性别分化、生长发育和繁殖中具有关键的调控作用,然而其分子调控机制尚不明确。开展蜕皮激素信号途径的研究,对于阐明甲壳类动物的蜕皮机制,促进虾蟹养殖业的发展具有重要意义。SNIP1（Smad nuclear interacting protein）是一个与Smad相互作用并含有多个锌指结构的蛋白,具有特异性的DNA结合活性,参与了多个信号通路的调控。克氏原螯虾,也称小龙虾,因肉味鲜美广受人们欢迎,近年来已经成为重要的水产养殖品种。本研究旨在探讨SNIP1在克氏原螯虾蜕皮激素信号通路中的功能,取得的主要结果如下:1、本实验根据已有部分序列,设计特异性引物克隆了克氏原螯虾Smad核互作蛋白1（SNIP1）基因的开放式阅读框序列（ORF,open reading frame）,生物信息学分析表明SNIP1基因的开放式阅读框序列全长为867bp,编码的蛋白质含有288个氨基酸残基,预测的成熟蛋白理论分子量分子量为34.9KDa,其等电点为6.18。其蛋白质C末端具有高度保守的FHA结构域,而其N端具有一段核定位序列,进化树分析表明克氏原螯虾SNIP1基因与无脊椎动物SNIP1... 

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摘要
ABSTRACT
1 文献综述
    1.1 SNIP1基因的研究现状
        1.1.1 SNIP1的发现
        1.1.2 SNIP1的结构
        1.1.3 SNIP1及其相关联蛋白的功能
    1.2 甲壳动物蜕皮的调节机制
        1.2.1 X-器官窦腺复合体及Y-器官
        1.2.2 蜕皮激素
        1.2.3 蜕皮抑制激素
        1.2.4 蜕皮激素响应基因
2 引言
    2.1 研究的目的及意义
    2.2 研究内容
        2.2.1 SNIP1基因序列的克隆
        2.2.2 SNIP1基因的原核表达及多抗制备
        2.2.3 SNIP1基因的表达分析
        2.2.4 蜕皮激素对SNIP1表达的影响
        2.2.5 SNIP1基因干扰对蜕皮激素响应基因表达的调节作用
    2.3 技术路线
3 材料与方法
    3.1 实验材料
    3.2 仪器与试剂
        3.2.1 主要实验仪器
        3.2.2 主要生化试剂
        3.2.3 常用溶液的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 SNIP1基因的克隆
        3.3.2
        3.3.3 重组蛋白检测及纯化
        3.3.4 多克隆抗体制备
        3.3.5 SNIP1的表达分析
4 结果与分析
    4.1 总RNA的检测
    4.2 SNIP1基因序列分析
    4.3 SNIP1基因的ORF序列扩增
    4.4 原核表达载体的构建
        4.4.1 目的片段的克隆鉴定
        4.4.2 双酶切鉴定
        4.4.3 菌落PCR鉴定
    4.5 重组SNIP1蛋白的表达及纯化
        4.5.1 SDS-PAGE检测
        4.5.2 重组蛋白纯化
        4.5.3 Western blot分析
    4.6 多克隆抗体制备
        4.6.1 BCA法蛋白定量
    4.7 SNIP1的表达分析
        4.7.1 SNIP1基因的组织定量
        4.7.2 注射蜕皮激素对SNIP1基因表达量影响
        4.7.3 SNIP1 RNA干扰对蜕皮激素响应基因表达水平的影响
5 讨论
    5.1 克氏原螯虾SNIP1序列分析
    5.2 克氏原螯虾SNIP1的原核表达
    5.3 荧光定量PCR和Western Blot
6 结论
参考文献
致谢
个人简介
攻读硕士期间发表论文情况



本文编号：3703158