Sox2在栉孔扇贝（Chlamys farreri）早期发育和性腺年周期发育过程中的表达分析

发布时间：2022-12-05 20:24

　　SOX2作为一种重要的转录因子，已经在脊椎动物中被确定参与胚胎发生、神经发生、晶状体发育以及诱导多能性胚胎干细胞形成中发挥重要的功能。本研究以重要的双壳类海洋经济物种——栉孔扇贝（Chlamys farreri）作为研究对象，通过RACE技术克隆获得了sox2的cDNA全长序列，并采用半定量RT-PCR、实时荧光定量PCR和原位杂交技术对其在栉孔扇贝早期发育的表达特征、各组织中的空间表达以及成体各发育时期性腺的表达定位进行了分析，以期为深入探讨该基因在扇贝中的作用提供基础数据。主要结果如下： 栉孔扇贝sox2（Cf-sox2）的cDNA全长序列为2194bp，包含一个编码327个氨基酸的开放阅读框，并具有SOX家族保守的HMG-box以及SOXB1亚族的SOXp motif结构。进一步发现栉孔扇贝SOX2中不存在脊椎动物SOX2中的两个末端结构，即在N末端不含有多聚甘氨酸结构，在C末端不具有富含丝氨酸的结构。 实时荧光定量RT-PCR结果显示，Cf-sox2是母源性基因；其表达量在卵裂期胚胎中较受精卵显著升高，囊胚中达到最高；原肠胚之后，表达量显著下降，并在壳顶幼虫降到最低... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1 Sox 基因家族的研究进展
        1.1 Sox 基因家族的分类
        1.2 SOX 家族成员的结构特征和功能
            1.2.1 SOX 家族成员的结构特征
                1.2.1.1 能够与 DNA 分子结合
                1.2.1.2 能够进行核内外转运
                1.2.1.3 与其他蛋白质间存在相互作用
                1.2.1.4 具有转录激活与转录抑制性质
                1.2.1.5 形成同源二聚体
                1.2.1.6 具有转录后的修饰作用
            1.2.2 SOX 家族成员的功能
                1.2.2.1 性别决定与分化
                1.2.2.2 胚胎发生
                1.2.2.3 神经发生和胶质细胞再生
                1.2.2.4 神经嵴发育
                1.2.2.5 骨骼形成
                1.2.2.6 造血作用
                1.2.2.7 内胚层和毛发的发育，心脏发育，血管形成
    2 Sox2 基因的研究进展
        2.1 Sox2 序列的特征
        2.2 Sox2 基因的功能
            2.2.1 作为转录因子参与转录调控
            2.2.2 参与早期胚胎发生
            2.2.3 参与神经发育
            2.2.4 参与晶状体发育
    3 Sox 基因在贝类中的研究现状
    4 本研究的目的及意义
第二章 栉孔扇贝 Cf-sox2 的 cDNA 克隆及在早期发育中的表达图式
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物和取样
            1.1.2 工具酶、试剂及实验仪器
            1.1.3 实验试剂
        1.2 实验方法
            1.2.1 总 RNA 提取
            1.2.2 cDNA 模板合成
            1.2.3 RACE-Ready cDNA 模板的合成
            1.2.4 RACE 扩增
            1.2.5 目的基因全长 cDNA 序列的获得和分析
            1.2.6 qRT-PCR
            1.2.7 原位杂交探针合成及探针效率检测
            1.2.8 整体原位杂交
    2 实验结果
        2.1 栉孔扇贝靶 cDNA 全长及序列特征分析
        2.2 Cf-sox2 mRNA 在栉孔扇贝早期发育过程中的定量表达
        2.3 Cf-sox2 mRNA 在栉孔扇贝胚胎和幼虫中的空间分布
    3 讨论
        3.1 Cf-sox2 基因与其他无脊椎动物 sox2 基因特征一致
        3.2 Cf-sox2 的母源性表达
        3.3 Cf-sox2 在栉孔扇贝中的表达特征与哺乳动物相似
第三章 栉孔扇贝 Cf-sox2 基因在性腺发育周期中的时空表达
    1 材料方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器、试剂盒和试剂配制
        1.3 实验方法
            1.3.1 组织切片制备和性腺分期
            1.3.2 总 RNA 提取和 cDNA 反转录
            1.3.3 半定量 RT-PCR
            1.3.4 切片原位杂交
    2 实验结果
        2.1 性腺发育周期的组织学观察
            2.1.1 增殖期性腺
            2.1.2 生长期性腺
            2.1.3 成熟期性腺
        2.2 Cf-sox2 在栉孔扇贝组织中的分布
        2.3 Cf-sox2 在栉孔扇贝性腺发育周期中的表达
    3 讨论
        3.1 Cf-sox2 基因在成体各组织中的表达分析
        3.2 Cf-sox2 基因在性腺发育周期中的表达分析
总结
参考文献
致谢
个人简历
发表与待发表学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular cloning and characterization of SoxB2 gene from Zhikong scallop Chlamys farreri[J]. 贺艳,包振民,郭慧慧,张月月,张玲玲,王师,胡景杰,胡晓丽.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2013(06)
[2]池蝶蚌Sox2基因在不同组织及不同月龄精巢中的表达[J]. 曾柳根,徐灵,王军花,盛军庆,辜清,彭扣,洪一江.  水生生物学报. 2012(02)
[3]双壳类的性转换现象及其机理探讨[J]. 于非非,余祥勇,王梅芳,周莉,桂建芳.  水生生物学报. 2007(04)
[4]Sox基因家族研究的新进展[J]. 常重杰,杜启艳,邵红伟.  遗传. 2002(04)
[5]中华鳖4个Sox基因保守区的序列分析[J]. 聂刘旺,单祥年,汪鸣,郭超文,鲁晓萱.  水生生物学报. 2001(03)
[6]SOX基因家族的研究现状[J]. 常重杰,周荣家,余其兴.  遗传. 2000(01)
[7]栉孔扇贝精子超微结构的研究[J]. 任素莲,王如才,王德秀.  青岛海洋大学学报(自然科学版). 1998(03)
[8]栉孔扇贝的生殖周期[J]. 廖承义,徐应馥,王远隆.  水产学报. 1983(01)

博士论文
[1]栉孔扇贝Cf-foxl2基因的克隆、表达模式及功能初探[D]. 刘晓玲.中国海洋大学 2012
[2]栉孔扇贝生殖相关基因DEAD-box家族和boule的cDNA克隆及其发育表达图式[D]. 邵明瑜.中国海洋大学 2007



本文编号：3710292