大菱鲆髓样分化因子88（MyD88）及干扰素刺激基因15（ISG15）的克隆及其免疫应答表达模式的研究

发布时间：2022-12-22 20:48

　　大菱鲆（Scophthatmus maximus）是我国北方海域的重要经济养殖鱼类品种，自引进以来其养殖规模不断增长，一旦受到疾病的侵染就会造成大规模鱼类的死亡，给大菱鲆养殖业造成严重的危害。髓样分化因子88（myeloid differentiation factor88，MyD88）是Toll样受体信号途径中的重要转导蛋白，在Toll样受体信号识别病原体启动病原相关分子模式中发挥着重要的作用。在病原体侵染宿主细胞后，细胞特异性受体能够特异性识别病原体，激活下游JAK-STAT信号转导途径产生细胞因子、趋化因子和干扰素并进一步激活下游的干扰素刺激基因（Interferon stimulated genes，ISGs），而ISG15就是ISGs其中的一员。ISG15能够通过直接与病毒蛋白相互作用，使其失去活性而发挥抗病毒作用，同时它作为一种重要的调节因子参与多种生理与免疫反应过程。因此，对于大菱鲆MyD88和ISG15的研究将会给大菱鲆抗病育种工作提供一定的理论基础。 本文以大菱鲆为研究对象，采用同源克隆及RACE技术，分别从大菱鲆的头肾组织中克隆得到大菱鲆MyD88基因的全长c... 

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摘要
Abstract
目录
第一章 前言
    1.1 机体的免疫反应
    1.2 先天免疫系统
    1.3 鱼类的先天免疫反应
        1.3.1 病原识别受体
        1.3.2 细胞因子的级联反应
    1.4 鱼类中 Toll 样受体的信号传导途径
    1.5 髓样分化因子 88（MyD88）
        1.5.1 MyD88 的发现
        1.5.2 MyD88 的分子特征及生物学作用
        1.5.3 MyD88 的在鱼类中的研究进展
    1.6 干扰素刺激基因
    1.7 干扰素刺激基因 15（ISG15）
        1.7.1 ISG15 的发现
        1.7.2 ISG15 的分子结构及生物学作用
        1.7.3 ISG15 在鱼类中的研究进展
    1.8 本研究的意义
第二章 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 cDNA 的克隆和序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物、菌株及质粒
        2.1.2 主要仪器与设备
        2.1.3 主要试剂及溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 大菱鲆组织的获取
        2.2.2 总 RNA 的提取及质量检测
        2.2.3 cDNA 第一链的合成
        2.2.4 大菱鲆 MyD88 以及 ISG15 全长 cDNA 的克隆
        2.2.5 大菱鲆 MyD88 与 ISG15 的 3’及 5’RACE 片段的克隆及测序
        2.2.6 全长 cDNA 序列的拼接
        2.2.7 大菱鲆 ISG15 基因序列的克隆
        2.2.8 序列分析与进化树的构建
    2.3 实验结果及分析
        2.3.1 RNA 样品的制备与质量检测
        2.3.2 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 核心片段的克隆及测序结果
        2.3.3 3’RACE 片段的克隆及测序结果
        2.3.4 5’RACE 片段的克隆及测序结果
        2.3.5 全长 cDNA 序列的拼接及分析
        2.3.6 SmMyD88 和 SmISG15 cDNA 序列的分子特征
        2.3.7 SmISG15 的基因组序列的克隆及测序结果
        2.3.8 SmISG15 的基因组结构特征
        2.3.9 SmMyD88 和 SmISG15 的系统进化分析
    2.4 讨论
第三章 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 mRNAs 的组织分布研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验所用的主要仪器与设备
        3.1.3 主要试剂及溶液的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 获取实验用的大菱鲆组织
        3.2.2 总 RNA 的提取及质量检测
        3.2.3 cDNA 第一链的合成
        3.2.4 引物设计
        3.2.5 Real-time PCR 检测
        3.2.6 数据的处理
    3.3 结果分析
    3.4 讨论
第四章 大菱鲆 ISG15 和 MyD88 基因的表达分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 鱼体及刺激物
        4.1.2 主要仪器与设备
        4.1.3 试剂及溶液配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 刺激物感染大菱鲆鱼体实验
        4.2.2 模板的制备
        4.2.3 Real-time PCR 检测
        4.2.4 统计学分析
    4.3 结果分析
    4.4 讨论
        4.4.1 SmMyD88 的表达分析情况
        4.4.2 SmISG15 的表达分析情况
结论
参考文献
致谢
个人简历
学术论文



本文编号：3724015