草鱼白细胞介素-4/13（IL-4/13）及其受体表达和功能初探

发布时间：2023-01-09 11:28

　　在哺乳动物中白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）是Ⅱ型辅助T淋巴细胞（Th cells）的标志细胞因子,参与机体特异性免疫和非特异性免疫应答过程。IL-4和IL-13在哺乳动物抵御病原微生物入侵的免疫应答反应中发挥重要作用。草鱼（Ctenopharyngodon idella）是我国重要的水产养殖鱼种,随着草鱼养殖产量和养殖密度的逐年增长,鱼体免疫力下降,病害爆发也越发频繁,造成了大量经济损失。柱状黄杆菌（Flavobacterium cloumnare）和草鱼呼肠孤病毒（GCRV）是两种严重威胁我国草鱼健康养殖的病原微生物。IL-4/13作为机体免疫系统中重要的免疫分子,在草鱼免疫系统抵御柱状黄杆菌和草鱼呼肠孤病毒入侵过程中发挥的功能和作用尚不明确,IL-4/13的受体基因与哺乳动物中同源基因的进化关系尚未解析,IL-4/13在草鱼巨噬细胞极化过程中的作用以及IL-4/13与各个受体链结合情况缺少系统研究。本研究以草鱼作为研究对象,首先克隆并鉴定了草鱼IL-4/13A和IL-4/13B两个配体基因的cDNA序列全长和六个受体基因包括γC1、γC2、IL-4Rα1... 

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
第二章 草鱼IL-4/13 及其受体基因克隆和序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验用鱼
        2.1.2 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 草鱼头肾和脾脏总RNA提取
        2.2.2 构建草鱼cDNA文库
        2.2.3 草鱼IL-4/13 及其受体基因的克隆鉴定
        2.2.4 序列分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B序列分析
        2.3.2 草鱼IL-4/13 受体序列分析
    2.4 小结与讨论
第三章 草鱼IL-4/13及受体表达模式分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验用鱼
        3.1.2 柱状黄杆菌
        3.1.3 Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)
        3.1.4 主要试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 柱状黄杆菌、Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒和PolyI:C感染及样品采集
        3.2.2 总RNA提取及构建荧光定量cDNA文库
        3.2.3 荧光定量PCR
        3.2.4 免疫组织化学分析
        3.2.5 数据分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 草鱼IL-4/13 及其受体基因的组织表达谱
        3.3.2 草鱼IL-4/13 及其受体基因对柱状黄杆菌和Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒感染的表达响应
        3.3.3 柱状黄杆菌和Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒感染草鱼后IL-4/13 分子在不同组织中的免疫组化分析
    3.4 小结与讨论
第四章 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B分子功能的比较研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验用鱼
        4.1.2 载体、表达菌株和抗体
        4.1.3 主要试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 构建原核表达载体
        4.2.2 IPTG小量诱导蛋白表达
        4.2.3 大量诱导表达重组蛋白
        4.2.4 包涵体的提取
        4.2.5 蛋白的复性与纯化
        4.2.6 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
        4.2.7 BCA法测定蛋白浓度
        4.2.8 Western Blot
        4.2.9 分离草鱼头肾原代细胞
        4.2.10 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白活性检测
        4.2.11 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白对草鱼巨噬细胞极化的影响
    4.3 实验结果
        4.3.1 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白的原核表达及纯化
        4.3.2 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白活性检测
        4.3.3 草鱼IL-4/13A和 IL-4/13B对草鱼头肾巨噬细胞极化的影响
    4.4 小结与讨论
第五章 全文总结
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文



本文编号：3729105