海水养殖中常见病原菌冻干保护剂配方与冻干工艺研究

发布时间：2023-02-13 18:39

　　长期保存海水养殖病原菌的活性是深入进行其病原学研究的重要前提和保障。真空冷冻干燥技术是目前情况下制备和保藏生物材料最有效的方法之一。本文初步探讨了真空冷冻干燥技术在5株海水养殖重要致病菌菌种保藏中的应用，相关的研究成果将为海洋细菌真空冷冻干燥工艺研究提供重要的参考和借鉴。 1.病原微生物冷冻干燥保护剂的筛选 实验选取迟钝爱德华氏菌、假交替单胞菌、哈维氏弧菌、灿烂弧菌、鳗弧菌等5株3属的病原细菌为实验菌株，以不同浓度的脱脂乳、海藻糖、甘露醇、乳糖、果糖、葡萄糖、抗坏血酸和明胶等八种物质作为冻干保护剂，以添加等体积1.50%氯化钠溶液为对照。结果表明：以不同浓度的抗坏血酸和明胶为冻干保护剂的实验组中均未检测到活菌的存在；与对照组相比，一定浓度的脱脂乳和糖类均可在冷冻干燥过程中对病原菌起到保护作用，各保护剂对菌株的冻干保护效果由强到弱依次为：假交替单胞菌：脱脂乳，麦芽糖，海藻糖，乳糖，甘露醇，葡萄糖，果糖；迟钝爱德华菌：脱脂乳，乳糖，甘露醇，海藻糖，麦芽糖，葡萄糖，果糖；哈维氏弧菌：甘露醇，海藻糖，乳糖，麦芽糖，果糖，脱脂乳，葡萄糖；鳗弧菌：乳糖，甘露醇，脱脂乳，麦芽糖，海藻糖，葡萄糖，果糖...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 海水养殖常见病原菌
        1.1 主要致病弧菌
            1.1.1 哈维氏弧菌
            1.1.2 鳗弧菌
            1.1.3 副溶血弧菌
            1.1.4 溶藻弧菌
        1.2 迟钝爱德华氏菌
        1.3 假交替单胞菌
    2 常见微生物菌种保存方法
        2.1 传代培养法
        2.2 载体保存法
        2.3 菌悬液保存法
        2.4 液体石蜡保藏法
        2.5 寄主保存法
        2.6 冷冻保存法
        2.7 冷冻干燥保存法
    3 冷冻干燥技术
        3.1 冷冻干燥的原理
        3.2 冷冻干燥的一般过程
            3.2.1 预冻结
            3.2.2 升华干燥
            3.2.3 解析干燥
        3.3 冷冻干燥对细胞的损伤机制
            3.3.1 机械损伤
            3.3.2 溶质损伤
            3.3.3 细胞膜损伤
            3.3.4 细胞代谢调节作用损伤
            3.3.5 遗传物质的损伤
            3.3.6 细胞内外 pH 平衡性的改变
        3.4 冷冻干燥技术的特点及应用
        3.5 影响细胞冻干效果的主要因素
            3.5.1 菌株特性
            3.5.2 培养条件
            3.5.3 初始细胞浓度
            3.5.4 冻干保护剂
            3.5.5 菌液与保护剂的混合比例
            3.5.6 冻结过程及冻结速度
            3.5.7 复水介质和复水条件
            3.5.8 储藏条件
        3.6 冷冻干燥保护剂
            3.6.1 冷冻干燥保护剂的保护机理
            3.6.2 冷冻干燥保护剂的种类
    4 本研究的目的和意义
第二章 病原微生物冷冻干燥保护剂的筛选
    1 实验材料
        1.1 菌种
        1.2 试剂
        1.3 仪器设备
    2 试验方法
        2.1 菌株及菌悬液制备
        2.2 冻干保护剂溶液的配制
        2.3 真空冷冻干燥工艺参数
        2.4 菌株冻干存活率测定
    3 结果分析
        3.1 假交替单胞菌冻干保护剂的筛选
        3.2 迟钝爱德华氏菌冻干保护剂的筛选
        3.3 哈维氏弧菌冻干保护剂的筛选
        3.4 鳗弧菌冻干保护剂的筛选
        3.5 灿烂弧菌冻干保护剂的筛选
    4 讨论
第三章 冷冻干燥保护剂配伍优化
    1 实验材料
        1.1 菌种
        1.2 试剂
        1.3 仪器设备
    2 试验方法
        2.1 菌株及菌悬液制备
        2.2 冻干保护剂溶液的配制
        2.3 真空冷冻干燥工艺参数
        2.4 菌株冻干存活率测定
    3 结果分析
        3.1 假交替单胞菌冻干保护剂的复配与正交分析
        3.2 迟钝爱德华氏菌冻干保护剂的复配与正交分析
        3.3 哈维氏弧菌冻干保护剂的复配与正交分析
        3.4 鳗弧菌冻干保护剂的复配与正交分析
        3.5 灿烂弧菌冻干保护剂的复配与正交分析
    4 讨论
第四章 真空冷冻干燥条件与工艺优化
    1 实验材料
        1.1 菌种
        1.2 试剂
        1.3 仪器设备
    2 试验方法
        2.1 菌株及菌悬液制备
        2.2 冻干保护剂溶液的配制
        2.3 保护剂最佳含盐量的优化
        2.4 初始细胞浓度对冻干存活率的影响
        2.5 复水介质对细菌存活率的影响
        2.6 菌液与保护剂的混合比例对细菌存活率的影响
        2.7 不同生长阶段对冻干存活率的影响
        2.8 真空冷冻干燥工艺参数
        2.9 菌株冻干存活率测定
    3 结果分析
        3.1 保护剂最佳含盐量的优化
        3.2 初始细胞浓度对冻干存活率的影响
        3.3 复水介质对细菌存活率的影响
        3.4 菌液与保护剂的混合比例对细菌存活率的影响
        3.5 不同生长阶段对冻干存活率的影响
    4 讨论
第五章 不同保存方式对细菌成活率的影响
    1 实验材料
        1.1 菌种
        1.2 试剂
        1.3 仪器设备
    2 试验方法
        2.1 菌株及菌悬液制备
        2.2 冻干保护剂溶液的配制
        2.3 冷冻干燥及超低温保藏过程
        2.4 菌株冻干存活率测定
    3 结果分析
        3.1 -80℃超低温保藏条件下菌种存活率的变化情况
        3.2 冷冻干燥保藏的两株病原菌细胞存活率的变化情况
    4 讨论
参考文献
附录
致谢
个人简历
学术成果



本文编号：3742100