弗劳地枸橼酸杆菌分离鉴定及其三重PCR检测方法的建立

发布时间：2023-02-14 10:22

　　为鉴定导致鲫鱼嘴部溃烂、肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法,本研究采用形态学、生理生化特性分析及16S rDNA序列分析方法从患病鲫鱼中分离鉴定病原菌株,并进行了动物回归实验。结果显示,从患病鲫鱼中分离菌株为弗劳地枸橼酸杆菌(Citrobacter freundii),命名为fsznc-08,该菌对鲫鱼具有致病性。针对该菌GalF基因、petA基因和FliC基因设计了3条特异性引物,通过对反应体系和条件的优化,建立了检测该菌的三重PCR方法,结果显示,三重PCR方法可准确扩增出弗劳地枸橼酸杆菌GalF、petA和FliC 3个目的基因,而其它菌株均未扩增出目的基因,特异性良好;该方法对该菌DNA最低检出限为6.09×10¹拷贝/μL。利用该方法检测人工感染患病鱼样品的阳性率约为93.33%,与单一PCR方法的检测率一致,但特异性和敏感性均高于单一PCR。本实验建立的弗劳地枸橼酸杆菌三重PCR检测法具有特异性强、敏感性高、操作简单、成本低的优点,为临床弗劳地枸橼酸杆菌的检测提供可行方法。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病原菌、实验动物及主要试剂
    1.2 病原菌的分离、培养和生理生化鉴定
    1.3 分离菌16S rDNA扩增及序列分析
    1.4 分离菌回归感染试验
    1.5 引物的设计与合成
    1.6 单一PCR反应条件的建立
    1.7 三重PCR反应条件的建立
    1.8 特异性试验
    1.9 敏感性试验
    1.1 0 多重PCR检测法的临床应用
2 结果
    2.1 分离菌的形态学和理化特性鉴定结果
    2.2 分离菌16S rDNA扩增及序列分析结果
    2.3 分离菌动物回归试验结果
    2.4 单一PCR和三重PCR扩增结果
    2.5 特异性试验结果
    2.6 敏感性试验结果
    2.7 三重PCR检测方法临床应用结果
3 讨论



本文编号：3742435