三株不同基因型草鱼呼肠孤病毒生物学特性的差异分析

发布时间：2023-02-18 18:02

　　草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为我国淡水鱼类养殖的主要品种之一，2012年全国渔业统计年鉴显示，我国淡水鱼类养殖产量为2334.11万吨，其中草鱼的养殖产量达478.17万吨，为我国所有养殖鱼类之首。而草鱼出血病的频繁爆发给我国草鱼养殖业造成了巨大经济损失，严重危害我国淡水养殖业的健康发展。草鱼呼肠孤病毒(grasscarp reovirus,GCRV)是致使草鱼出血病爆发的主要病原，是中国大陆分离的第一株鱼类病毒，也是目前毒力最强的水生呼肠孤病毒之一。GCRV的基因组为分11个节段的dsRNA，变异性较强，目前已有40多株分离株得到鉴定。根据VP6基因序列比较，GCRV分离株至少存在3种基因型，代表株分别为Ⅰ型GCRV873、Ⅱ型GCRV HZ08和Ⅲ型GCRV104(HGDRV)，但不同基因型毒株在同等条件下形态、基因组带型、致细胞病变、同种细胞和鱼体中增殖情况等生物学特性未见系统的比较和分析。本研究根据VP4编码蛋白的基因序列对目前已有的毒株构建系统进化树进行分子分型，并结合本实验室保存的毒株进行基因组带型分析，筛选了来自三个不同基因型的GCRV。根据不...

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摘要
ABSTRACT
目录
第一章 前言
    1 草鱼呼肠孤病毒研究进展
        1.1 草鱼呼肠孤病毒的生物学特性
        1.2 草鱼呼肠孤病毒的基因组研究
        1.3 草鱼呼肠孤病毒的基因型问题
        1.4 草鱼呼肠孤病毒检测技术的建立
        1.5 草鱼出血病的防控
    2 本研究目的和意义
第二章 草鱼呼肠孤病毒的基因分型及不同基因型 GCRV荧光定量检测方法的建立
    1 材料与方法
        1.1 细胞与病原
        1.2 主要试剂和仪器
        1.3 病毒基因组 SDS-PAGE 电泳
        1.4 系统进化树的构建
        1.5 引物的设计与合成
        1.6 标准质粒的制备
        1.7 标准曲线构建与灵敏度试验
        1.8 特异性与重复性试验
        1.9 临床应用
    2 结果
        2.1 病毒基因分型结果
        2.2 荧光定量检测方法的建立和应用
    3 讨论
第三章 三株不同基因型草鱼呼肠孤病毒的生物学特性比较
    1 材料与方法
        1.1 试验材料与病原
        1.2 主要试剂与仪器
        1.3 电镜样品的制备
        1.4 pH 对不同基因型 GCRV 稳定性影响
        1.5 乙醚与胰蛋白酶对不同基因型 GCRV 稳定性影响
        1.6 冻融对不同基因型 GCRV 稳定性影响
        1.7 细胞增殖试验
        1.8 鱼体感染试验
        1.9 不同基因型 GCRV 间免疫交叉保护性试验
    2 结果
        2.1 形态学观察
        2.2 理化特性
        2.3 不同基因型 GCRV 的细胞增殖特性差异
        2.4 不同基因型 GCRV 在稀有鮈鲫中增殖差异
        2.5 不同基因型病毒间免疫交叉保护率
    3 讨论
全文总结
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3745434