锦鲤疱疹病毒诱导的细胞凋亡与抗病毒药物筛选

发布时间：2023-02-26 04:33

　　鲤鱼,包括观赏性的锦鲤,是欧洲和亚洲的重要淡水养殖品种,具有重要的经济与生态价值。然而,自1998年在以色列和美国暴发锦鲤疱疹病毒病以来,锦鲤疱疹病毒病随后在全球范围流行。锦鲤疱疹病毒病的病原为锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus, KHV),因其是从鲤科鱼体内分离鉴定的第三个疱疹病毒,因此其又称为鲤疱疹病毒Ⅲ型(Cyprinid Herpesvirus3, CyHV-3)。由KHV感染养殖鲤鱼引起的疱疹病毒病是近年严重危害我国鲤鱼养殖业的一种重大传染性疾病,已经造成重大经济损失。目前,锦鲤疱疹病毒病尚无有效的防治方法。本文研究了KHV感染锦鲤鳍条细胞(Koi-Fin)诱导其发生凋亡的过程,并在建立的细胞感染系统中进行了抗锦鲤疱疹病毒天然药物筛选,为锦鲤疱疹病毒病防治技术研究与应用奠定了前期基础。研究内容和结果如下： 1.锦鲤疱疹病毒(KHV)感染锦鲤鳍条细胞(Koi-Fin)诱导其发生凋亡的研究。KHV感染锦鲤鳍条细胞(Koi-Fin),根据凋亡形态学特征检测,采用hoechst33258染色检测方法,根据凋亡生化特征检测,采用TUNEL反应、DAN片段化检测、流式细胞术检测...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
第一章 文献综述
    1.1 锦鲤鲤疱疹病毒研究进展
        1.1.1 锦鲤疱疹病毒病的症状及流行病学
        1.1.2 锦鲤疱疹病毒的特征
        1.1.3 锦鲤疱疹病毒病的诊断
    1.2 细胞凋亡及其意义
        1.2.1 细胞凋亡的概念
        1.2.2 细胞凋亡的形态学以及生化特征变化
        1.2.3 细胞凋亡过程中相关凋亡因子
        1.2.4 细胞凋亡的检测方法
        1.2.5 细胞凋亡与病毒感染
    1.3 抗病毒药物研究
        1.3.1 抗病毒药物分类
        1.3.2 抗病毒药物筛选的模型研究
        1.3.3 中药抗病毒药物研究进展
    1.4 研究目的与意义
第二章 锦鲤疱疹病毒KHV诱导锦鲤鳍条细胞凋亡的研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试剂
        2.1.2 细胞、病毒材料与病滴度测定
        2.1.3 hoechst33258荧光染色
        2.1.4 TUNEL检测
        2.1.5 DNA Ladder实验
        2.1.6 亚G1期(sub-G1)细胞检测
        2.1.7 JC-1检测线粒体膜电位变化
    2.2 结果
        2.2.1 Koi-Fin细胞病变效应
        2.2.2 Hoechst 33258荧光染色
        2.2.3 TUNEL检测
        2.2.4 DNA Ladder实验
        2.2.5 亚G1期细胞检测
        2.2.6 流式细胞仪JC-1检测
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 体外抗锦鲤疱疹病毒的植物药物筛选及其效果比较研究
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 病毒培养及滴度测定
        3.1.3 药物对Koi-Fin细胞的毒性测定
        3.1.4 药物筛选与抗病毒效果检测
        3.1.5 统计学分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 病毒培养及滴度测定结果
        3.2.2 药物对Koi-Fin细胞毒性的测定结果
        3.2.3 先给药后感染试验组抑制KHV复制的结果
        3.2.4 先感染后给药试验组抑制KHV复制的结果
        3.2.5 药物与病毒共孵育后感染试验组抑制KHV复制的结果
    3.3 讨论
    3.4 结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3749827