钙信号对镉诱导河南华溪蟹细胞凋亡的调控

发布时间：2023-02-26 05:10

　　本论文以河南华溪蟹(Sinopptamon henanense)为实验动物,选择五个时间(12、24、48、72、96 h)段、三个镉浓度(14.5mg·L-1、29mg·L-1、58mg·L-1)组处理。首先研究了镉对肝胰腺Ca2+-Mg2+/Na+-K+-ATPase活性和组织形态学的影响,旨在探讨镉对肝胰腺细胞的氧化损伤和毒性效应；采用生理生化、酶学组织化学和琼脂糖凝胶电泳法,分别检测了肝胰腺细胞钙调素(CaM)含量、钙ATP酶(Ca2+-ATPase)活性、Caspase-3和Caspase-9活性,以及镉对肝胰腺细胞DNA的影响,旨在研究镉对肝胰腺细胞钙稳态和凋亡的影响。在此基础上,为了探明Ca2+信号是否参与镉诱导的细胞凋亡,进一步研究了钙抑制剂(EGTA, LaCL3)预处理对镉诱导细胞凋亡的影响,探索镉诱导细胞凋亡过程中信号传递途径和调控机理。实验结果如下：(1)不同浓度镉处理引起肝胰腺细胞Ca2+-Mg2+/Na+-K+-ATPase的活性在12 h和24 h显著升高,之后随着时间的推移,酶活性开始下降,说明镉可对膜蛋白产生氧化损伤。(2)在组织形态学上,急性58 m...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1 镉污染
    2 镉的毒性机制
        2.1 氧化损伤
        2.2 镉对遗传物质的影响
        2.3 镉对细胞膜的影响
            2.3.1 镉对膜脂质的影响
            2.3.2 镉对膜蛋白的影响
        2.4 镉破坏细胞钙平衡
    3 镉与细胞凋亡
        3.1 细胞凋亡
        3.2 细胞凋亡的途径
            3.2.1 死亡受体起始的外源途径
            3.2.2 线粒体起始的内源途径
        3.3 镉与细胞凋亡
    4 镉诱导细胞凋亡信号途径
        4.1 自由基信号与细胞凋亡
            4.1.1 NO信号与细胞凋亡
            4.1.2 ROS信号与细胞凋亡
        4.2 钙信号
        4.3 钙调素(CAM)
        4.4 钙ATP酶(Ca²⁺-ATPase)
    5 本论文的研究意义及实验设计
        5.1 本论文的研究意义
        5.2 实验设计
第二章 镉对河南华溪蟹肝胰腺ATPase及组织结构的影响
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 试剂与仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 实验设计
            1.3.2 样品采集和处理
        1.4 Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性测定
        1.5 Na⁺K⁺-ATPase活性测定
        1.6 组织形态学检测
        1.7 总蛋白含量测定
        1.8 数据分析
    2 结果
        2.1 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性的影响
        2.2 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞Na⁺-K⁺-ATPase活性的影响
        2.3 镉对河南华溪蟹肝胰腺组织形态学影响
    3 讨论
    abstract
第三章 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞凋亡的影响
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 实验药品
        1.3 仪器设备
        1.4 实验设计
        1.5 琼脂糖凝胶电泳实验
        1.6 样品制备
        1.7 测定原理
        1.8 Caspase-3,9活性检测
        1.9 数据分析
    2 结果
        2.1 琼脂糖凝胶电泳检测镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞凋亡的影响
        2.2 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞Caspase-3活性的影响
        2.3 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞Caspase-9活性的影响
    3 讨论
    abstract
第四章 钙信号对镉诱导河南华溪蟹细胞凋亡的调控
    搞要
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 试剂与仪器
        1.3 实验方法与设计
        1.4 CaM含量测定
        1.5 Ca²⁺-ATPase活性检测
        1.6 组织酶学检测
        1.7 Caspase-3,9活性检测
        1.8 总蛋白含量测定
        1.9 数据分析
    2 结果
        2.1 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞CaM含量的影响
        2.2 镉对河南华溪蟹肝胰腺细胞Ca²⁺-ATPase活性的影响
        2.3 镉对河南华溪蟹肝胰腺组织Ca²⁺-ATPase组织酶学检测
        2.4 Ca²⁺抑制剂EGTA和LaCl₃预处理对镉诱导肝胰腺Caspase-3,9的影响
    3 讨论
    Abstract
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
承诺书



本文编号：3749886