斜带石斑鱼肝细胞原代培养及皮质醇对其代谢的影响

发布时间：2023-02-28 17:47

　　1.斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法的建立通过不同的分离方法和培养条件探索斜带石斑鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞原代培养模型,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化。采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)水平,分析原代培养肝细胞生长状态。结果表明,斜带石斑鱼肝细胞原代培养不适合采用组织块方法,而胰蛋白酶消化法则获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108 cells/g肝重,活细胞数达到95%;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199两种培养基;启动原代培养的48-72 h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清中LDH活性显著降低(P<0.05),ALB和BUN含量显著升高(P<0.05)。结果显示,0.25%的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
主要符号表
第1章 引言
    1.1 文献综述
        1.1.1 海水鱼类细胞培养研究进展
        1.1.2 皮质醇对机体代谢调节的研究进展
    1.2 研究内容
    1.3 本实验的研究目的和意义
第2章 斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法建立
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验鱼饲养管理
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 肝细胞原代培养方法
        2.1.4 肝细胞活力测定
        2.1.5 斜带石斑鱼肝细胞最佳培养基的确定
        2.1.6 肝细胞增殖率鉴定
        2.1.7 斜带石斑鱼肝细胞功能测定
        2.1.8 数据处理
    2.2 结果
        2.2.1 分离与纯化方法对斜带石斑鱼肝细胞数量和活力的影响
        2.2.2 不同培养基对斜带石斑鱼肝细胞原代培养的影响
        2.2.3 MTT法测定不同培养时间斜带石斑鱼肝细胞增殖率的变化
        2.2.4 不同培养时间斜带石斑鱼肝细胞培养上清液中LDH活性、ALB含量和BUN含量的变化
    2.3 讨论
    2.4 小结
第3章 皮质醇对斜带石斑鱼原代培养肝细胞功能的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验鱼饲养管理
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 肝细胞分离及原代培养
        3.1.4 皮质醇孵育实验
        3.1.5 肝细胞增殖率鉴定
        3.1.6 生化分析
        3.1.7 数据处理
    3.2 结果
        3.2.1 皮质醇对肝细胞增值率的影响
        3.2.2 原代培养肝细胞生理功能分析
    3.3 讨论
    3.4 小结
第4章 皮质醇对原代培养肝细胞糖和脂肪代谢的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验鱼饲养管理
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 肝细胞分离及原代培养
        4.1.4 皮质醇孵育实验
        4.1.5 生化分析
        4.1.6 肝细胞总RNA提取和荧光定量PCR
        4.1.7 数据处理
    4.2 结果
        4.2.1 肝细胞葡萄糖释放以及肝细胞内糖原、丙酮酸和甘油三酯含量分析
        4.2.2 肝细胞代谢相关酶活性分析
        4.2.3 肝细胞代谢相关基因表达表达量分析
    4.3 讨论
    4.4 小结
全文总结
致谢
参考文献
在学期间科研成果情况



本文编号：3751574