大黄鱼硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD1)基因的克隆与鉴定及在低温条件下对膜流动性影响

发布时间：2023-05-13 05:04

　　大黄鱼(Pseudosciaena crocea)属于鲈形目、石首鱼科,是我国主要的海洋经济鱼类之一。本研究旨在探究SCD1基因与膜流动性的关系并为大黄鱼的抗冻性能提高提供一种新思路。为了增强大黄鱼(Pseudosciaena crocea)在寒冷条件下的抗冻性,本研究对单一不饱和脂肪酸合成中的一个关键性酶——硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)进行了研究。一下是研究结果:1、对大黄鱼SCD家族中的SCD1基因进行了克隆与鉴定(已上传至Genbank,登陆号:KP731998)。大黄鱼SCD1基因全长1388bp,编码335个氨基酸。与鲈鱼(Dicentrarchus labrax)(Genbank登录号:FN868643.1)的SCD1序列有98%以上的相似性。2、对大黄鱼SCD1基因序列进行分析,发现该基因编码的蛋白属于非分泌型蛋白,且该蛋白没有特定的亚细胞定位,推测其是在细胞质中发挥功能。3、对该基因的表达进行了组织特异性分析,通过半定量RT-PCR的实验手段表明了SCD1广泛表达于脑、脾脏、肝脏、肾脏、心脏和肌肉6个组织,其中肝、肾和心脏具有较高的表达量。利用SCD1基因原核表达出来...

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
    1.1 鱼类抗寒的研究
        1.1.1 营养对于鱼类抗寒能力的研究
        1.1.2 鱼类抗寒的分子生物学研究
    1.2 SCD基因家族的研究进展
        1.2.1 SCD基因的发现与表达分布
        1.2.2 SCD基因的功能
        1.2.3 SCD基因的调节
    1.3 细胞膜流动性的研究
        1.3.0 细胞膜流动性的研究手段
        1.3.1 细胞膜流动性的影响因素
        1.3.2 本研究的内容、目的及意义
第二章 大黄鱼（Pseudosciaena crocea）硬脂酰-辅酶A脱氢酶 Ⅰ（SCD1）基因的克隆与序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器和试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 SCD1基因的本地blast与序列预测
        2.2.2 大黄鱼各组织总RNA的提取与逆转录总RNA
        2.2.3 大黄鱼SCD1基因的克隆与鉴定
        2.2.4 大黄鱼SCD1基因序列分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 大黄鱼SCD1基因的克隆与鉴定
        2.3.2 大黄鱼SCD1基因序列分析
第三章 大黄鱼（Pseudosciaena crocea）SCD1基因表达模式的研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器和试剂
        3.1.3 实验试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 大黄鱼SCD1基因组织特异性检测
        3.2.2 原核表达质粒的构建
        3.2.3 原核表达小规模诱导
        3.2.4 原核表达大规模诱导
        3.2.5 聚丙烯胶凝胶电泳检测原核表达产物
        3.2.6 蛋白纯化
        3.2.7 多克隆抗体制备
        3.2.8 免疫组织化学
        3.2.9 真核表达质粒构建
        3.2.10 Western blot分析
        3.2.11冻存细胞的复苏、培养与传代
        3.2.12冻存细胞的培养与传代
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 大黄鱼SCD1基因组织特异性检测
        3.3.2 大黄鱼SCD1原核蛋白表达
        3.3.3 大黄鱼SCD1抗体的Western blot分析
        3.3.4 大黄鱼SCD1基因真核表达
    3.4 讨论
第四章 大黄鱼（Pseudosciaena crocea）SCD1基因对于膜流动性的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器与试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 光漂白荧光恢复实验(FRAP)
        4.2.2 实验数据处理
    4.3 实验结果
        4.3.1 光漂白荧光恢复实验结果
        4.3.2 最佳温度下细胞膜流动性情况
        4.3.3 温度梯度下细胞膜流动性变化情况
    4.4 讨论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果



本文编号：3815360