丝氨酸蛋白酶抑制因子在日本囊对虾中的克隆与功能研究

发布时间：2023-05-13 16:26

　　甲壳动物占有水生节肢动物中最大的比例,其经济价值不可估量。其中对虾是甲壳类中最重要的水产养殖动物,然而由于多种细菌和病毒入侵虾体导致疾病甚至死亡,使对虾养殖业遭受巨大损失。其中鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是海水养殖对虾产业的主要病原菌之一。因此,对于对虾先天免疫机理的研究,不仅可以为防治虾病提供新方法及基础理论指导,同时还可以丰富无脊椎动物的先天免疫理论,与模式生物的研究互为印证,具有重要的实际意义和科学意义。丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpin)能够特异性的抑制丝氨酸蛋白酶,参与到对虾的酚氧化酶原激活系统中,调控机体的黑化作用,从而参与对虾的抗病原体免疫过程。目前对于丝氨酸蛋白酶抑制因子的其他生物学功能目前了解仍不多。因此,对Serpin的研究不仅可以获得对该基因功能的新认识,为阐明其在对虾先天免疫中的作用奠定基础；还可以丰富丝氨酸蛋白酶抑制因子的理论体系,为对虾养殖实践中虾病的防治提供理论依据,具有重要的理论和现实意义。 我们从日本囊对虾中鉴定出九种丝氨酸蛋白酶抑制因子,分别命名为MjSerp1-9,它们的组织分布模式各有不同,在受到鳗弧菌和白斑病毒刺激后,部分丝氨...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词说明
第一章 综述
    一.甲壳动物的疾病
        1. 甲壳动物的研究意义
        2. 侵害对虾的主要病原菌
    二.甲壳动物的先天免疫系统
        1. 先天免疫概述
        2. 先天免疫的模式识别
        3. 免疫信号的转导
        4. 细胞免疫
        5. 体液免疫
    三.丝氨酸蛋白酶抑制因子的研究进展
        1. 丝氨酸蛋白酶
        2. 丝氨酸蛋白酶抑制因子
    四.本论文研究的目的、意义与技术路线
第二章 丝氨酸蛋白酶抑制因子在日本囊对虾先天免疫中的功能研究
    一.前言
    二.材料方法
        1. 试剂和仪器
        2. 菌株与载体
        3. 实验材料和免疫刺激
        4. RNA提取和DNA合成
        5. MjSerp1 cDNA全长克隆
        6. 序列分析
        7. MjSerp1 mRNA水平组织分布和表达模式
        8. 重组蛋白表达和纯化
        9. 前酚氧化酶抑制实验
        10. 微生物结合实验
        11. 抗菌活性检测
        12. 蛋白酶抑制实验
        13. 细菌清除实验
        14. 体内RNA干扰与细菌清除实验
        15. 免疫细胞化学检测蛋白的核质定位
        16. 免疫共沉淀检测蛋白相互作用
    三.实验结果
        1. MjSerp1-9的组织分布和表达模式
        2. MjSerp1的序列分析
        3. MjSerp1的组织分布和表达模式
        4. MjSerp1的重组表达、纯化和功能研究
        5. MjSerp1的抗菌活性及细菌结合实验
        6. MjSerp1的蛋白酶抑制实验
        7. MjSerp1促进了日本囊对虾的体内清除鳗弧菌作用
    四.讨论
创新点总结
参考文献
致谢
在读期间发表文章
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3816158