金钱鱼性别特异分子标记的筛选及雌雄群体遗传多样性分析

发布时间：2023-05-13 20:10

　　金钱鱼不但是一种具有观赏和食用价值的名贵海水经济鱼类,而且雌性生长速度明显高于雄性。因此,获得雌雄性别差异分子标记,从遗传角度鉴定金钱鱼的性别,对实现分子辅助育种及后续的单性化养殖意义重大。目前,随着环境恶化,金钱鱼种质资源退化越来越严重,因此,对金钱鱼遗传多样性进行评估,可为制定科学的资源保护提供理论参考。本文以金钱鱼为研究对象,采用SSR、AFLP、SRAP三种分子标记技术筛选其雌雄性别差异标记,并分析雌、雄群体遗传多样性。主要结果如下:1、基于SSR技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析以金钱鱼基因组为模板,通过磁珠富集法得到65条微卫星序列,并设计了45对引物对金钱鱼雌雄基因池进行初步筛选。结果发现,2对引物(SAS21、SAS23)可扩增出雌雄差异条带。分别以雌雄金钱鱼各30尾DNA为模板,再次采用引物SAS21、SAS23进行扩增。引物SAS21扩增的差异条带在雌性金钱鱼中出现比率为30%,在雄性金钱鱼中所占比率为10%;而引物SAS23扩增的差异条带在雌性金钱鱼中所占比率为10%,在雄性金钱鱼中出现比率为60%。以筛选获得多态性较高的3对微卫星引物对金钱...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SSR、AFLP、SRAP三种分子标记的简介
        1.1.1 SSR标记技术
        1.1.2 AFLP标记技术
        1.1.3 SRAP标记技术
    1.2 SSR、AFLP、SRAP三种标记在性别差异标记中的应用
        1.2.1 SSR标记技术在性别差异标记中的应用
        1.2.2 AFLP标记技术在性别差异标记中的应用
        1.2.3 SRAP标记技术在性别差异标记中的应用
    1.3 SSR、AFLP、SRAP三种分子标记在遗传多样性方面的应用
        1.3.1 SSR标记技术在遗传多样性的应用
        1.3.2 AFLP在遗传多样性的应用
        1.3.3 SRAP标记技术在遗传多样性的应用
    1.4 金钱鱼的研究现状
    1.5 本研究的目的和意义
2 基于SSR技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要仪器与工具
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 实验方法
            2.1.4.1 冰冻切片技术鉴定雌雄金钱鱼
            2.1.4.2 基因组DNA的提取
            2.1.4.3 酶切及接头连接
            2.1.4.4 磁珠富集及片段克隆
            2.1.4.5 筛选阳性克隆及序列测定
            2.1.4.6 微卫星序列分析及引物设计
            2.1.4.7 筛选微卫星多态性引物
            2.1.4.8 建立雌雄金钱鱼的BSA基因池
            2.1.4.9 金钱鱼雌雄差异条带的筛选
            2.1.4.10 数据分析
    2.2 结果
        2.2.1 SSR序列的分析
        2.2.2 金钱鱼雌雄性腺切片图
        2.2.3 基于SSR技术的雌雄差异条带的筛选
        2.2.4 基于SSR技术的雌雄群体遗传多样性的分析
    2.3 讨论
        2.3.1 SSR序列的分析
        2.3.2 基于SSR技术的雌雄差异条带的筛选
        2.3.3 基于SSR的雌雄群体遗传多样性的分析
        2.3.4 关于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的若干问题
3 基于AFLP技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 引物与接头序列
        3.1.3 方法
            3.1.3.1 基因组DNA的提取
            3.1.3.2 基因组DNA的酶切
            3.1.3.3 接头的连接
            3.1.3.4 预扩增反应
            3.1.3.5 选择性扩增反应
            3.1.3.6 变性聚丙烯酰胺凝胶的制备
            3.1.3.7 电泳
            3.1.3.8 银染
            3.1.3.9 数据统计及分析
    3.2 实验结果
        3.2.1 基于AFLP技术的雌雄差异条带的筛选
        3.2.2 基于AFLP技术的雌雄群体遗传多样性的分析
    3.3 讨论
        3.3.1 基于AFLP技术的雌雄差异条带的筛选
        3.3.2 基于AFLP技术的雌雄群体遗传多样性的分析
        3.3.3 关于变形聚丙烯酰胺凝胶电泳的若干问题
4 基于SRAP技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验方法
            4.1.2.1 基因组DNA的提取
            4.1.2.2 SRAP扩增
            4.1.2.3 数据分析
    4.2 实验结果
        4.2.1 基于SRAP技术的雌雄差异条带的筛选
        4.2.2 基于SRAP技术的雌雄群体遗传多样性的分析
    4.3 讨论
        4.3.1 基于SRAP技术的雌雄差异条带的筛选
        4.3.2 基于SRAP技术的雌雄群体遗传多样性的分析
5 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3816437