日本囊对虾中参与抗菌反应的四种甲壳肽的研究

发布时间：2023-05-14 20:36

　　甲壳肽(Crustin)是甲壳类动物中一类阳离子的、富含半胱氨酸的、具有抗菌活性的多肽,在其序列的C末端包含一个乳清酸性蛋白(WAP)结构域。甲壳动物中一共有三种类型的甲壳肽(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型)。他们在抗菌免疫反应中有不同的功能。我们在日本囊对虾Marsupenaeus japonicus)中得到了四种甲壳肽的cDNA序列,把它们命名为MjCrus1、2、3、4。四种crustin的开放阅读框序列分别为294bp,375bp,333bp,342bp,编码含有97,124,110,113个氨基酸的蛋白序列。所有的四个甲壳肽均为Ⅰ型甲壳肽。组织分布显示,MjCrus1、2、3在血细胞和鳃中表达量较高,而MjCrus4则呈现出组成型表达。进一步的表达模式分析显示,在受到革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及白斑综合征病毒(WSSV)刺激后,四种crustin的表达模式有差别,其中MjCrus1、3、4在细菌刺激后上升较为明显,而MjCrus2则受病毒刺激诱导。四种甲壳肽用大肠杆菌表达系统进行重组表达,没有检测到重组蛋白的抗菌活性。接下来又检测了重组蛋白对细菌分泌的蛋白酶的抑制活性,发现除了MjCru...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一部分 综述
    第一章 无脊椎动物先天免疫系统
        1. 模式识别受体
        2. 细胞免疫
            2.1 血细胞的吞噬作用
            2.2 血细胞的结节形成和包囊作用
        3. 体液免疫应答
            3.1 血淋巴的凝结作用
            3.2 酚氧化酶原激活系统介导的黑化作用
            3.3 抗菌肽的产生
    第二章 甲壳肽的研究进展
        1. 甲壳肽的结构
        2. 甲壳肽的类型
        3. 甲壳肽功能
            3.1 抗菌功能与蛋白酶抑制剂功能
            3.2 甲壳肽的体内功能
    目的意义
    技术路线
第二部分 日本囊对虫下四种甲壳肽的功能研宄
    一、前言
    二、材料方法
        1. 材料
            1.1 实验材料
            1.2 菌株和载体
            1.3 试剂和仪器
        2. 方法
            2.1. 总RNA的提取
            2.2 第一链cDNA的合成
            2.3 基因克隆
            2.4 序列比对和进化树构建
            2.5 半定量PCR
            2.6 实时定量PCR
            2.7 重组蛋白的表达
            2.8 重组蛋白纯化
            2.9 重组蛋白抑制细菌分泌蛋白酶活性检测
            2.10 干扰后的细菌清除实验
            2.11 重组蛋白的细菌结合实验
    三、实验结果
        3.1 基因克隆和序列分析
        3.2 序列比对和进化树分析
        3.3 四种甲壳肽的组织分布
        3.4 表达模式分析
        3.5 重组蛋白的表达和纯化
        3.6 重组蛋白可以抑制细菌所分泌蛋白酶
        3.7 细菌结合实验
        3.8 甲壳肽可以增强对虾的弧菌清除能力
    四、讨论
总结
参考文献
致谢
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3817720