TH与IIS信号通路对杂色鲍幼虫能量代谢的调控
发布时间：2023-05-18 20:49
本文依托实验室自建的杂色鲍转录组数据库、网络NCBI和KEGG数据库,筛选出若干杂色鲍幼虫能量代谢相关的基因片段,并构建了杂色鲍幼虫能量代谢调控网络。通过设计RNA干扰实验和诱导实验,利用qPCR和原位杂交检测基因表达情况,主要研究结果如下:(1)以甲状腺激素信号通路和胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路基因为核心,结合NCBI的核酸数据库、文献和网上的资料,经过序列拼接并使用Blast2Go软件对其转录组序列进行注释分析,最终获得具有明确功能注释的候选基因序列186个,将其分为细胞组分、生物学过程和分子功能共三类。进一步分析各基因表达量变化趋势,将106条表达量具有显著性差异基因的功能进行分析,归类为免疫或应激反应、蛋白质翻译过程、细胞新陈代谢、细胞周期、膜蛋白、转录调节、染色体组成、钙离子结合、神经系统和未知九类。(2)使用统计学软件SPSS对所有基因两两之间的表达量相关系数r进行计算,并将结果导入Cytoscape软件中,绘制杂色鲍幼虫能量代谢调控网络,这是对爆炸性增长的测序数据发掘利用的一次尝试。(3)RNA干扰实验和诱导实验结果显示甲状腺激素能正调控的信号通路有MAPK(ERK)...
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
1.1 软体动物能量代谢研究进展
1.1.1 环境温度对能量代谢的影响
1.1.2 体重与能量代谢的关系
1.1.3 盐度对能量代谢的影响
1.1.4 摄食与饥饿对能量代谢的影响
1.1.5 其它因素对能量代谢的影响
1.1.6 软体动物胚胎及幼虫发育过程中能量代谢底物的研究
1.2 TH信号通路与IIS信号通路对能量代谢的调控
1.2.1 TH信号通路研究进展及其对能量代谢的调控
1.2.2 IIS信号通路研究进展及其对能量代谢的调控
1.2.3 TH信号通路与IIS信号通路的相关性
1.3 整胚原位杂交技术简介
1.3.1 整胚原位杂交发展历程及原理
1.3.2 整胚原位杂交的应用
1.4 本研究的目的
1.5 研究内容和意义
第2章 能量代谢调控网络的构建
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 实验流程设计
2.2.2 文库构建与序列拼接
2.2.3 功能分析
2.2.4 表达趋势归类
2.2.5 相关度分析
2.2.6 网络生成及优化
2.3 实验结果
2.3.1 序列拼接与功能分析
2.3.2 表达趋势归类
2.3.3 相关度分析
2.3.4 网络优化及结果输出
2.4 讨论
第3章 TH信号通路对能量代谢的调控
3.1 实验材料
3.1.1 杂色鲍成鲍与幼虫采样
3.1.2 主要仪器和试剂
3.1.3 引物
3.2 实验方法
3.2.1 异硫氰酸胍(GT)一步法提取总RNA
3.2.2 总RNA逆转录合成cDNA第一条链
3.2.3 普通PCR获取体外转录模板序列
3.2.4 割胶纯化PCR产物
3.2.5 载体连接
3.2.6 制备感受态细胞
3.2.7 感受态细胞的转化及培养
3.2.8 阳性单克隆菌株筛选
3.2.9 菌液测序
3.2.10 干扰实验与诱导实验
3.2.11 实时荧光定量PCR
3.2.12 胚胎整体原位杂交
3.3 实验结果
3.3.1 总RNA提取结果
3.3.2 干扰探针模板的制备结果
3.3.3 双链探针制备结果
3.3.4 干扰实验结果
3.3.5 诱导实验结果
3.4 讨论
第4章 IIS信号通路对能量代谢的调控
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.3 实验结果
4.3.1 总RNA提取结果
4.3.2 干扰探针模板的制备结果
4.3.3 双链探针制备结果
4.3.4 干扰实验结果
4.3.5 诱导实验结果
4.4 讨论
第5章 结论与展望
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
本文编号：3818971
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
1.1 软体动物能量代谢研究进展
1.1.1 环境温度对能量代谢的影响
1.1.2 体重与能量代谢的关系
1.1.3 盐度对能量代谢的影响
1.1.4 摄食与饥饿对能量代谢的影响
1.1.5 其它因素对能量代谢的影响
1.1.6 软体动物胚胎及幼虫发育过程中能量代谢底物的研究
1.2 TH信号通路与IIS信号通路对能量代谢的调控
1.2.1 TH信号通路研究进展及其对能量代谢的调控
1.2.2 IIS信号通路研究进展及其对能量代谢的调控
1.2.3 TH信号通路与IIS信号通路的相关性
1.3 整胚原位杂交技术简介
1.3.1 整胚原位杂交发展历程及原理
1.3.2 整胚原位杂交的应用
1.4 本研究的目的
1.5 研究内容和意义
第2章 能量代谢调控网络的构建
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 实验流程设计
2.2.2 文库构建与序列拼接
2.2.3 功能分析
2.2.4 表达趋势归类
2.2.5 相关度分析
2.2.6 网络生成及优化
2.3 实验结果
2.3.1 序列拼接与功能分析
2.3.2 表达趋势归类
2.3.3 相关度分析
2.3.4 网络优化及结果输出
2.4 讨论
第3章 TH信号通路对能量代谢的调控
3.1 实验材料
3.1.1 杂色鲍成鲍与幼虫采样
3.1.2 主要仪器和试剂
3.1.3 引物
3.2 实验方法
3.2.1 异硫氰酸胍(GT)一步法提取总RNA
3.2.2 总RNA逆转录合成cDNA第一条链
3.2.3 普通PCR获取体外转录模板序列
3.2.4 割胶纯化PCR产物
3.2.5 载体连接
3.2.6 制备感受态细胞
3.2.7 感受态细胞的转化及培养
3.2.8 阳性单克隆菌株筛选
3.2.9 菌液测序
3.2.10 干扰实验与诱导实验
3.2.11 实时荧光定量PCR
3.2.12 胚胎整体原位杂交
3.3 实验结果
3.3.1 总RNA提取结果
3.3.2 干扰探针模板的制备结果
3.3.3 双链探针制备结果
3.3.4 干扰实验结果
3.3.5 诱导实验结果
3.4 讨论
第4章 IIS信号通路对能量代谢的调控
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.3 实验结果
4.3.1 总RNA提取结果
4.3.2 干扰探针模板的制备结果
4.3.3 双链探针制备结果
4.3.4 干扰实验结果
4.3.5 诱导实验结果
4.4 讨论
第5章 结论与展望
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
本文编号：3818971
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3818971.html
