Sox 9α基因在中国林蛙中的表达模式及OP对精巢中Sox 9α表达的影响

发布时间：2023-05-21 22:06

　　为探讨Sox9α在中国林蛙(Rana chensinensis)成体性腺功能的维持中的作用以及辛基酚(Octylphenol, OP)对Sox9α表达的影响。本研究首先克隆了中国林蛙精巢的Sox9α基因,将其测序结果导入SeqMan序列拼接；分别用Blast, ORF, SignalP, ProParam, SMART, NPS@, SWISS-MODEL软件进行同源性分析,预测序列的开放阅读框、信号肽、蛋白分子重量、功能结构域、等电点、蛋白质的二级和三级结构。然后,选取两栖和爬行动物的12个物种进行ClustalW2比对,MEGA5.1建树,分析中国林蛙Sox9α基因的进化地位。其次,用Semi-quantity RT-PCR检测Sox9α在中国林蛙成体的精巢、卵巢、肾脏、肝脏、脑以及32-46期蝌蚪的表达。最后,将雄性中国林蛙成体暴露于10-5,10-6,10-7,10-8mol/L OP进行处理,分别在10、20和30d取其精巢,用Real-time Quantity PCR技术检测Sox9α在精巢的表达。结果与分析如下： 1.在中国林蛙成体精巢中首次扩增到长为1580bp的So...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 烷基酚类物质的雌激素效应及Sox基因的研究进展
    1.1 环境内分泌干扰物的类型与分布
    1.2 OP对动物内分泌和生殖的毒性效应
        1.2.1 OP对类固醇激素合成的影响
        1.2.2 OP对动物的生殖毒性
    1.3 Sox基因家族的研究进展
        1.3.1 Sox基因在脊椎动物胚胎发育中的表达
    1.4 Sox 9基因的研究进展
    1.5 本研究的目的及意义
第2章 中国林蛙的Sox 9α克隆、进化及机能分析
    2.1 前言
    2.2 材料
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要仪器
        2.2.3 动物处理
    2.3 方法
        2.3.1 Total RNA 提取
        2.3.2 cDNA的合成
        2.3.3 引物设计与合成
        2.3.4 RT-PCR 扩增
        2.3.5 胶体回收
        2.3.6 载体构建
        2.3.7 质粒提取
        2.3.8 质粒酶切
        2.3.9 功能结构域预测及进化树构建
    2.4 结果与分析
        2.4.1 Sox 9α基因的克隆
        2.4.2 序列拼接及比对
        2.4.3 蛋白质结构预测
        2.4.4 ClustalW2分析及进化树构建
        2.4.5 Sox9α mRNA的组织表达
    2.5 讨论
第3章 辛基酚对中国林蛙精巢Sox 9α表达的影响
    3.1 前言
    3.2 材料
        3.2.1 主要试剂
        3.2.2 主要仪器
        3.2.3 动物处理
    3.3 方法
        3.3.1 Total RNA 提取
        3.3.2 cDNA 的合成
        3.3.3 引物设计与合成
        3.3.4 RT-PCR 及测序
        3.3.5 实时定量PCR
        3.3.6 Sox 9α探针合成
        3.3.7 原位杂交
    3.4 结果与分析
        3.4.1 RT-PCR及测序
        3.4.2 实时定量PCR
        3.4.3 Sox 9α RNA探针合成
        3.4.4 Sox 9α 的细胞定位
    3.5 讨论
总结
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间研究成果



本文编号：3821510