鲤疱疹病毒Ⅱ型灭活疫苗免疫应答机理与保护效果研究

发布时间：2023-05-21 19:32

　　异育银鲫(Carassius gibelio)是我国重要的经济鱼类,在淡水养殖中占有非常重要的地位。近年来,我国鲫鱼养殖业中暴发一种病毒性疾病——鲫造血器官坏死症,其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2),给鲫鱼养殖业造成重大经济损失,严重影响了鲫鱼养殖业的发展。疫苗免疫被认为是预防水产养殖动物传染性疾病最为有效的方法。本研究对CyHV-2细胞培养灭活疫苗的制备方法、有效免疫剂量、鲫鱼免疫后的外周血免疫指标、血清生化指标变化规律与保护效果进行了研究,初步建立一种预防鲫造血器官坏死症的免疫方法。本论文的主要内容如下:1.采用β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活细胞培养的鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)制备灭活疫苗,分别以不同剂量的疫苗通过腹腔注射免疫健康异育银鲫。在免疫后7、14、21、28d,从对照组和各免疫组中随机挑选三尾鲫鱼尾静脉采血,取血清进行中和抗体滴度测定。免疫30d后攻毒试验,每尾鲫鱼经腹腔注射500 ul的1.0×107TCID50ml-1的CyHV-2活病毒,持续观察14d,记录鱼体死亡情况,评价不同剂量疫苗...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表（按字母顺序排列）
第一章 文献综述
    1 鲤疱疹病毒II型研究进展
        1.1 国内外流行现状
        1.2 鲫造血器官坏死症流行病学研究
            1.2.1 鲫造血器官坏死症的临床症状
            1.2.2 鲫造血器官坏死症的流行特征
        1.3 鲤疱疹病毒II型的理化和生物学特征
        1.4 鲤疱疹病毒II型的检测技术
            1.4.1 电镜技术
            1.4.2 细胞培养技术
            1.4.3 分子生物学检测
                1.4.3.1 聚合酶链式反应（PCR）
                1.4.3.2 巢式PCR
                1.4.3.3 实时荧光定量PCR
                1.4.3.4 环介导等温扩增技术
    2 鱼类免疫系统研究
        2.1 鱼类非特异性免疫
            2.1.1 血细胞
                2.1.1.1 红细胞
                2.1.1.2 白细胞
            2.1.2 血清酶活性
                2.1.2.1 溶菌酶
                2.1.2.2 超氧化物歧化酶
            2.1.3 吞噬细胞
            2.1.4 补体
        2.2 鱼类特异性免疫
            2.2.1 淋巴细胞
            2.2.2 抗体
    3 渔用疫苗的研究
        3.1 疫苗的分类
            3.1.1 传统疫苗
            3.1.2 新型疫苗
        3.2 疫苗的免疫途径
            3.2.1 注射免疫
            3.2.2 浸泡免疫
            3.2.3 口服免疫
        3.3 影响疫苗免疫效果的因素
            3.3.1 疫苗免疫原性
            3.3.2 免疫剂量
            3.3.3 免疫佐剂
    4 研究目的及意义
第二章 鲤疱疹病毒II型（CyHV-2）细胞培养灭活疫苗有效免疫剂量研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 病毒与细胞系
            1.1.3 实验试剂
            1.1.4 实验器皿
            1.1.5 实验仪器与设备
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞培养灭活疫苗的制备
            1.2.2 疫苗的无菌检验与安全性检测
            1.2.3 疫苗有效免疫剂量的测定
            1.2.4 注射免疫与采血
            1.2.5 中和抗体效价测定
            1.2.6 攻毒试验
        1.3 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 疫苗的无菌检验与安全性检验
        2.2 中和抗体检测
        2.3 相对免疫保护率
    3 讨论
第三章 CyHV-2 灭活疫苗注射免疫异育银鲫效果研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 试验鱼及饲养条件
            1.1.2 病毒、细胞系及菌株
            1.1.3 试验试剂
            1.1.4 试验器皿
            1.1.5 试验仪器与设备
            1.1.6 引物设计
        1.2 实验方法
            1.2.1 CyHV-2 细胞培养灭活疫苗的制备
            1.2.2 吞噬原的制备
            1.2.3 注射免疫
            1.2.4 样品采集与处理
                1.2.4.1 血清采集与处理
                1.2.4.2 组织采集与处理
            1.2.5 免疫指标的检测
                1.2.5.1 血液生理指标
                1.2.5.2 吞噬细胞的吞噬活性
                1.2.5.3 血清酶活性测定
                1.2.5.4 中和抗体效价检测
            1.2.6 Real-time PCR检测样品中IL-11和C3补体基因表达量
                1.2.6.1 总RNA提取和cDNA的合成
                1.2.6.2 Real-time PCR分析
            1.2.7 攻毒试验
        1.3 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 血细胞计数
        2.2 白细胞分类计数
        2.3 吞噬细胞吞噬活性
        2.4 血清酶活性
        2.5 中和抗体效价
        2.6 免疫相关基因的表达变化
        2.7 相对免疫保护率
    3 讨论
结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3821316