亚硝酸盐急性胁迫对草鱼内质网应激PERK通路的影响

发布时间：2023-06-02 22:49

　　草鱼是我国一种重要的淡水养殖鱼类,多年来在全国淡水养殖鱼类总产量中排名第一,亚硝酸盐是生态系统氮循环中的一种重要中间产物,可污染养殖水,水体中产生过多的亚硝酸盐会使鱼体中毒甚至死亡。亚硝酸盐可引起鱼类的应激,内质网应激是一种常见的应激反应,其中的PERK通路对细胞抵御环境刺激起着重要的作用。本研究探讨了急性亚硝酸盐暴露对草鱼及其分离细胞的内质网应激、抗氧化、血液生化、细胞活力和凋亡等方面的影响,旨在为控制养殖水体中亚硝酸盐浓度提供理论基础。急性攻毒实验选取体格健康的1龄草鱼(37.21±0.30 g),分别暴露于0 mg/L、8 mg/L、13 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的亚硝酸盐溶液中0 h、12 h、24 h、48 h、96 h后,收集鳃、肝脏、肌肉、血液等样品,检测草鱼肝脏和肌肉中grp78、perk、eif-2α、atf4、chop、bax、bcl-2基因的表达,观察草鱼肝脏、鳃的组织学结构,检测草鱼血液中的生理生化指标和抗氧化酶活性。体外实验以草鱼离体肝细胞(L8824)、肾细胞(CIK)为材料,将L8824细胞暴露于不同浓度的亚硝酸盐溶液后,检测细胞活力、内质...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
1 文献综述
    1.1 亚硝酸盐概述
        1.1.1 亚硝酸盐的来源
        1.1.2 亚硝酸盐的毒性机制
        1.1.3 亚硝酸盐对鱼类的毒性效应
    1.2 内质网应激
        1.2.1 内质网应激概述
        1.2.2 未折叠蛋白反应
        1.2.3 内质网应激与细胞凋亡
        1.2.4 内质网应激在鱼类中的研究进展
    1.3 亚硝酸盐与内质网应激
    1.4 研究目的与意义
2 实验材料与方法
    2.1 实验设计
        2.1.1 亚硝酸盐急性攻毒草鱼实验设计
        2.1.2 亚硝酸盐急性攻毒细胞实验设计
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 组织样品采集
        2.2.2 血液生化指标测定
        2.2.3 组织总RNA的提取、反转录和实时荧光定量PCR
        2.2.4 组织切片观察
        2.2.5 细胞实验方法
        2.2.6 数据分析
3 结果与分析
    3.1 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼的影响
        3.1.1 鳃、肝脏的组织学结构
        3.1.2 血液抗氧化酶
        3.1.3 血液生化指标
        3.1.4 草鱼中内质网应激PERK通路基因的组织表达
        3.1.5 草鱼肝脏中内质网应激相关基因的表达
        3.1.6 草鱼肌肉中内质网应激基因的表达
    3.2 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼肝细胞的影响
        3.2.1 细胞活力
        3.2.2 基因表达检测
        3.2.3 细胞凋亡检测
        3.2.4 细胞形态观察
        3.2.5 细胞内[Ca²⁺]_i检测
        3.2.6 抑制剂2-APB对细胞内[Ca²⁺]_i信号的影响
        3.2.7 PERK抑制剂GSK2656157 对细胞凋亡的影响
    3.3 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼肾细胞的影响
        3.3.1 细胞活力
        3.3.2 基因表达检测
        3.3.3 细胞凋亡检测
        3.3.4 细胞形态观察
4 讨论
    4.1 内质网应激相关基因的表达
    4.2 肝脏、鳃的组织病理学
    4.3 血液生化指标、抗氧化酶
    4.4 细胞活力、凋亡、[Ca²⁺]_i信号及细胞形态
    4.5 结论
参考文献
发表论文及专利情况
致谢



本文编号：3828170