乌克兰鱗鲤PK、PEPCK基因的克隆及其对不同糖水平的应答
发布时间：2023-08-01 18:01
本试验以乌克兰鳞鲤(Ukraine scale carp)为研究对象,采用cDNA末端快速扩增(RACE)和降落PCR(touch down PCR)技术对其丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的全长cDNA序列进行解析,运用DNAStar,NCBI等软件和数据库进行了序列分析、同源比对、系统进化树的构建和蛋白高级结构预测。1.获得乌克兰鳞鲤全长PKcDNA序列1913bp,其中开放阅读框1617bp,翻译538个氨基酸,预测分子质量为58.72kDa,等电点为6.57,3’非翻译区长154bp及多聚腺苷酸尾巴,5’非翻译区长143bp。具有活性位点和结构域边界。乌克兰鳞鲤PK保守性较好,与已知的草鱼、斑马鱼和绿河鲀的相似性为84%92%,与哺乳类(人类PEPCK)的相似度为68%。2.获得乌克兰鳞鲤全长PEPCKcDNA序列2567bp,其中开放阅读框1911bp,翻译636个氨基酸,预测分子质量为69.76kDa,等电点为7.89,3’非翻译区长526bp及多聚腺苷酸尾巴,5’非翻译区长151bp。具有活性位点,GTP结合位点,金属结合位点...
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
第一章 文献综述
第一节 研究背景
1 鱼类对饲料糖的利用能力
2 鱼类体内糖代谢的调节
2.1 胰岛素的调节
2.2 糖代谢酶的调节
3 乌克兰鳞鲤研究进展
4 RACE技术简介
4.1 3’RACE技术原理
4.2 5’RACE技术原理
4.3 RACE技术在水产动物研究中的应用
5 降落PCR技术简介
第二节 研究的目的与意义
第三节 主要试验内容
第二章 乌克兰鳞鲤PK基因的克隆及序列分析
第一节 材料和方法
1 试验鱼的暂养
2 克隆载体与宿主细菌
3 主要试剂和试剂盒
4 主要试验仪器
5 引物设计
6 乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA 的制备
7 第一链cDNA的合成
8 PCR扩增PK基因中间片段
9 3’RACE PCR
10 5’RACE PCR
11 琼脂糖电泳检测PCR扩增结果
12 回收纯化PCR产物
13 感受态细胞的制备
14 T-A克隆
15 感受态细胞的转化
16 菌液PCR方法筛选阳性克隆
17 序列分析
第二节 结果与分析
1 乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA 的制备
2 乌克兰鳞鲤 PK 基因的克隆与测序结果
第三节 讨论
1 PCR方法的选择
2 乌克兰鳞鲤 PK 基因序列的分析
第三章 乌克兰鳞鲤PEPCK基因的克隆及序列分析
第一节 材料和方法
1 试验鱼的暂养
2 克隆载体与宿主细菌
3 主要试剂和试剂盒
4 主要试验仪器
5 引物设计
6 制备乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA
7 合成第一链 cDNA
8 PCR扩增PEPCK基因中间片段
9 3’RACE PCR
10 5’RACE PCR
11 琼脂糖电泳检测PCR扩增结果
12 回收纯化PCR产物、T-A克隆、转化感受态细胞
13 菌液PCR方法筛选阳性克隆
14 序列分析
第二节 结果与分析
1 乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA 的制备
2 乌克兰鳞鲤 PEPCK 基因的克隆与测序结果
第三节 讨论
1 PCR方法的选择
2 乌克兰鳞鲤 PEPCK 基因序列的分析
第四章 不同营养水平下乌克兰鳞鲤各组织PK、PEPCK基因的差异性表达的分析
第一节 材料和方法
1 试验鱼的暂养
2 主要试剂和试剂盒
3 主要试验仪器
4 引物设计
5 饲养和取样
6 制备乌克兰鳞鲤各组织总 RNA
7 合成乌克兰鳞鲤各组织第一链 cDNA
8 PCR 确定低糖组、高糖组和禁食组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达
第二节 结果与分析
1 禁食组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达水平
2 低糖组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达水平
3 高糖组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达水平
第三节 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表文章情况
本文编号：3838088
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
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中文摘要
英文摘要
第一章 文献综述
第一节 研究背景
1 鱼类对饲料糖的利用能力
2 鱼类体内糖代谢的调节
2.1 胰岛素的调节
2.2 糖代谢酶的调节
3 乌克兰鳞鲤研究进展
4 RACE技术简介
4.1 3’RACE技术原理
4.2 5’RACE技术原理
4.3 RACE技术在水产动物研究中的应用
5 降落PCR技术简介
第二节 研究的目的与意义
第三节 主要试验内容
第二章 乌克兰鳞鲤PK基因的克隆及序列分析
第一节 材料和方法
1 试验鱼的暂养
2 克隆载体与宿主细菌
3 主要试剂和试剂盒
4 主要试验仪器
5 引物设计
6 乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA 的制备
7 第一链cDNA的合成
8 PCR扩增PK基因中间片段
9 3’RACE PCR
10 5’RACE PCR
11 琼脂糖电泳检测PCR扩增结果
12 回收纯化PCR产物
13 感受态细胞的制备
14 T-A克隆
15 感受态细胞的转化
16 菌液PCR方法筛选阳性克隆
17 序列分析
第二节 结果与分析
1 乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA 的制备
2 乌克兰鳞鲤 PK 基因的克隆与测序结果
第三节 讨论
1 PCR方法的选择
2 乌克兰鳞鲤 PK 基因序列的分析
第三章 乌克兰鳞鲤PEPCK基因的克隆及序列分析
第一节 材料和方法
1 试验鱼的暂养
2 克隆载体与宿主细菌
3 主要试剂和试剂盒
4 主要试验仪器
5 引物设计
6 制备乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA
7 合成第一链 cDNA
8 PCR扩增PEPCK基因中间片段
9 3’RACE PCR
10 5’RACE PCR
11 琼脂糖电泳检测PCR扩增结果
12 回收纯化PCR产物、T-A克隆、转化感受态细胞
13 菌液PCR方法筛选阳性克隆
14 序列分析
第二节 结果与分析
1 乌克兰鳞鲤肝胰脏总 RNA 的制备
2 乌克兰鳞鲤 PEPCK 基因的克隆与测序结果
第三节 讨论
1 PCR方法的选择
2 乌克兰鳞鲤 PEPCK 基因序列的分析
第四章 不同营养水平下乌克兰鳞鲤各组织PK、PEPCK基因的差异性表达的分析
第一节 材料和方法
1 试验鱼的暂养
2 主要试剂和试剂盒
3 主要试验仪器
4 引物设计
5 饲养和取样
6 制备乌克兰鳞鲤各组织总 RNA
7 合成乌克兰鳞鲤各组织第一链 cDNA
8 PCR 确定低糖组、高糖组和禁食组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达
第二节 结果与分析
1 禁食组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达水平
2 低糖组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达水平
3 高糖组乌克兰鳞鲤各组织 PK、PEPCK 基因的表达水平
第三节 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表文章情况
本文编号：3838088
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