牙鲆三种免疫基因的克隆及表达分析
发布时间：2023-09-03 21:47
趋化因子是一类具有化学趋化功能的小分子分泌性蛋白(6-14 k Da)。研究者最初从哺乳动物中发现趋化因子,它能够趋化白细胞到损伤或者感染的部位,参与免疫调节和病理反应。趋化因子家族大都具有保守的半胱氨酸序列,基于前两个半胱氨酸的排列,趋化因子被归为四种类型:CXC、CC、C和CX3C。CXC趋化因子的前两个半胱氨酸中间插入了一个其它的氨基酸。趋化因子的受体是具有七个跨膜区的G蛋白偶联受体。趋化因子受体和它们的配体,是启动和控制免疫细胞转移模式的重要因子,在先天性和获得性免疫系统的功能中发挥重要的作用。根据结合的趋化因子的不同,将趋化因子受体分为CXCR1-CXCR5(与CXC结合)、CCR1-CCR9(与CC结合)、XCR1(与C结合)、CX3CR(与CX3C结合)。牙鲆是一种很重要的海产鱼类,具有较高的营养价值和经济价值,被广泛养殖于中国、韩国和日本等亚洲国家。近年来随着牙鲆高密度工厂化养殖的不断发展和养殖环境的恶化,各种疾病也频繁爆发,对牙鲆养殖业造成了巨大的经济损失。虽然采用了抗菌素等传统的药物治疗取得了一定的效果,但随着细菌耐药性的增强以及药物在鱼体内的残留,给消费者的健康造...
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
1 趋化因子概况
1.1 趋化因子结构及其分类
1.2 CXC趋化因子
2 趋化因子受体概况
2.1 趋化因子受体结构及其分类
2.2 趋化因子受体的信号转导机制
2.3 趋化因子与趋化因子受体CCL20/CCR6的研究进展
3 硬骨鱼类中趋化因子及其受体的研究
3.1 鱼类中CXC趋化因子的研究
3.2 鱼类中CCR趋化因子受体的研究
4 趋化因子及其受体的功能
4.1 趋化因子及其受体在免疫中的作用
4.2 趋化因子及其受体在生理和病理反应中的作用
4.2.1 趋化因子及其受体在淋巴细胞的生成及归巢中的作用
4.2.2 趋化因子及其受体在抗原提呈与T、B淋巴细胞的活化中的作用
4.2.3 趋化因子及其受体促进T细胞的极化
4.2.4 在损伤愈合中的作用
4.2.5 在炎症反应中的作用
4.2.6 在肿瘤中的作用
4.2.7 趋化因子及其受体在抗HIV感染中的作用
第二章 牙鲆CXCL9趋化因子的克隆、鉴定与表达分析
1 实验材料
1.1 实验用鱼
1.2 主要试剂和仪器
2 实验方法
2.1 组织样本采集
2.2 牙鲆各组织RNA的提取
2.3 cDNA第一链的合成
2.4 CXCL9基因cDNA克隆验证
2.4.1 中间序列验证RCP引物和RACE引物合成
2.4.2 CXCL9中间序列验证
2.4.3 PCR产物纯化
2.4.4 目的片段的连接与转化
2.4.5 阳性克隆的检测与测序
2.4.6 3'RACE-ready cDNA和 5'RACE-ready cDNA的制备
2.4.7 大菱鲆趋化因子cDNA 5'和 3'末端的快速扩增（RACE）
2.5 序列和进化分析
2.6 实时荧光相对定量PCR
3 结果与分析
2.1 牙鲆CXCL9基因的克隆
2.2 牙鲆CXCL9基因的序列比对及同源性分析
2.3 实时荧光定量PCR检测结果
4 讨论
第三章 牙鲆两种新型单外显子PoCCR6A和PoCCR6B基因的克隆和表达分析
1 实验材料
1.1 实验用鱼
1.2 总RNA的提取及cDNA的合成
1.3 总DNA的提取
1.4 牙鲆PoCCR6A和PoCCR6B的克隆
1.5 序列分析和进化树分析
1.6 PoCCR6A和PoCCR6B的组织表达
1.7 PoCCR6A和PoCCR6B在细菌感染后的表达
1.8 数据分析
2 结果与分析
2.1 牙鲆PoCCR6A和PoCCR6B基因的克隆分析
2.2 序列分析和进化树分析
2.3 牙鲆PoCCR6A和PoCCR6B基因的组织表达分析
2.4 PoCCR6A和PoCCR6B趋化因子受体在鳗弧菌感染后组织中的表达分析
3 讨论
总结与展望
参考文献
硕士期间科研成果
致谢
本文编号：3845831
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
1 趋化因子概况
1.1 趋化因子结构及其分类
1.2 CXC趋化因子
2 趋化因子受体概况
2.1 趋化因子受体结构及其分类
2.2 趋化因子受体的信号转导机制
2.3 趋化因子与趋化因子受体CCL20/CCR6的研究进展
3 硬骨鱼类中趋化因子及其受体的研究
3.1 鱼类中CXC趋化因子的研究
3.2 鱼类中CCR趋化因子受体的研究
4 趋化因子及其受体的功能
4.1 趋化因子及其受体在免疫中的作用
4.2 趋化因子及其受体在生理和病理反应中的作用
4.2.1 趋化因子及其受体在淋巴细胞的生成及归巢中的作用
4.2.2 趋化因子及其受体在抗原提呈与T、B淋巴细胞的活化中的作用
4.2.3 趋化因子及其受体促进T细胞的极化
4.2.4 在损伤愈合中的作用
4.2.5 在炎症反应中的作用
4.2.6 在肿瘤中的作用
4.2.7 趋化因子及其受体在抗HIV感染中的作用
第二章 牙鲆CXCL9趋化因子的克隆、鉴定与表达分析
1 实验材料
1.1 实验用鱼
1.2 主要试剂和仪器
2 实验方法
2.1 组织样本采集
2.2 牙鲆各组织RNA的提取
2.3 cDNA第一链的合成
2.4 CXCL9基因cDNA克隆验证
2.4.1 中间序列验证RCP引物和RACE引物合成
2.4.2 CXCL9中间序列验证
2.4.3 PCR产物纯化
2.4.4 目的片段的连接与转化
2.4.5 阳性克隆的检测与测序
2.4.6 3'RACE-ready cDNA和 5'RACE-ready cDNA的制备
2.4.7 大菱鲆趋化因子cDNA 5'和 3'末端的快速扩增（RACE）
2.5 序列和进化分析
2.6 实时荧光相对定量PCR
3 结果与分析
2.1 牙鲆CXCL9基因的克隆
2.2 牙鲆CXCL9基因的序列比对及同源性分析
2.3 实时荧光定量PCR检测结果
4 讨论
第三章 牙鲆两种新型单外显子PoCCR6A和PoCCR6B基因的克隆和表达分析
1 实验材料
1.1 实验用鱼
1.2 总RNA的提取及cDNA的合成
1.3 总DNA的提取
1.4 牙鲆PoCCR6A和PoCCR6B的克隆
1.5 序列分析和进化树分析
1.6 PoCCR6A和PoCCR6B的组织表达
1.7 PoCCR6A和PoCCR6B在细菌感染后的表达
1.8 数据分析
2 结果与分析
2.1 牙鲆PoCCR6A和PoCCR6B基因的克隆分析
2.2 序列分析和进化树分析
2.3 牙鲆PoCCR6A和PoCCR6B基因的组织表达分析
2.4 PoCCR6A和PoCCR6B趋化因子受体在鳗弧菌感染后组织中的表达分析
3 讨论
总结与展望
参考文献
硕士期间科研成果
致谢
本文编号：3845831
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