草鱼Fibulin-4蛋白与草鱼呼肠孤病毒蛋白的相互作用研究

发布时间：2024-02-15 14:09

　　Fibulin家族蛋白属于分泌型糖蛋白,主要与包括基底膜和弹性微细纤维在内的细胞外基质的各种结构组件相互作用,参与细胞外基质的构成并维持其稳定。Fibulin蛋白可以调节各种细胞过程如细胞生长、分化,血管生成及肿瘤生长,然而,它们在骨骼发育和疾病方面的作用仍不清楚。草鱼(Ctenopharyngodon idella)为我国主要淡水养殖品种,占全国鱼类养殖产量首位,至今仍在长江中下游暴发流行,波及全国,年死亡损失超过30%,严重危害草鱼养殖业的发展。研究草鱼呼肠孤病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用有助于阐明病毒蛋白的生物学功能及病毒致病机理。利用前期本实验室的酵母双杂交筛选与GCRV-JX01的VP7和GCRV-JX02W的VP56相互作用的蛋白,共同筛选出了一个细胞外基质蛋白Fibulin-4,进一步发现Fibulin-4在草鱼的肌肉、脑、肠道中表达水平较高,这与临床中草鱼出血病的红肌肉、红鳃盖和红肠症状相吻合。我们尝试运用分子生物学和细胞生物学方法进一步验证Fibulin-4与两种GCRV外衣壳蛋白之间的相互作用。本课题主要从以下三点进行研究:1杆状病毒表达II型呼肠孤病毒外突VP56蛋...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图７ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析纯化的ＧＳＴ与ＧＳＴ－Ｆｉｂｕｌｉｎ－４蛋白

ｉｏｎＫｉｔ试剂盒，裂解细胞表达的ＧＦＰ蛋白与ＧＦＰ－Ｆｉｂｕｌｉｎ－４蛋白与结合Ｈｉｓ－ＶＰ７，Ｈｉｓ－ＶＰ５６的Ｈｉｓ－ＰｕｒＣｏｂａｌｔＲｅｓｉｎ，通过均能够在Ｅｌｕｔｉｏｎ中检测到ＧＦＰ－Ｆｉｂｕｌｉｎ－４蛋白质，而检测不到对照蛋白质ＧＦＰ（图９），进一步证实了ＶＰ７，Ｖ....

图1-1S7基因PCR扩增电泳图

图1-1S7基因PCR扩增电泳ctrophoreticprofileofPCRprod为约4000bp特异性条带(图图1-2杆粒DNA扩增电泳图

图1-2杆粒DNA扩增电泳图

14图1-2杆粒DNA扩增电泳图phoreticprofileofPCRproduct表达及纯化毒表达系统用户手册于六育细胞72h，每天观察细细胞生长停滞，呈囊泡状pm离心5min，采用0.22μmffer30μL，100℃煮沸5mi清反复冻融后制样，Wes....

图2-1HisPull-Down试验流程图

将杆状病毒表达的His-VP7与His-VP56蛋白去结合His珠子，与在GCO细胞中真核表达的GFP-Fibulin-4蛋白孵育，GFP-N1蛋白作为空白对照。一：诱饵蛋白的裂解（1）从-80℃拿出已表达的蛋白（表达的VP7和VP56蛋白）（15mL离心管中）（2）每5....

本文编号：3899877