马氏珠母贝免疫效应分子的克隆及功能研究
发布时间：2024-06-04 05:40
抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是机体先天免疫系统的重要组成部分,对细菌,真菌和病毒等病原体具有广泛的抑制作用。贝类是一种滤食性的水生生物,时刻面临着水体中大量微生物的侵袭,因此,贝类已进化出一套有效的先天免疫系统,特别是依靠其抗菌肽进行免疫防御。马氏珠母贝是一种具有重要经济价值的珍珠贝,但是目前在马氏珠母贝中尚未发现有代表性的抗菌肽分子,这意味着马氏珠母贝可能依靠其他的免疫效应分子来进行免疫防御。为了进一步探究马氏珠母贝抵抗环境病原体的分子机理,本研究基于马氏珠母贝基因组数据库,从基因层面出发,筛选马氏珠母贝免疫效应分子并进行克隆,分析免疫效应分子在病原体相关分子模式(Pathogen associated molecular pattern,PAMPs)刺激后的组织表达情况,构建原核表达载体,对重组蛋白开展抗菌机制研究。结果如下:(1)免疫效应分子的筛选与克隆:利用在线Antimicrobial peptide database(APD)的抗菌肽氨基酸序列构建本地数据库,与马氏珠母贝基因组比对,成功筛选出4种免疫效应分子并克隆获得c DNA全长,分别...
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 海洋无脊椎动物抗菌肽研究进展
1.2 胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶研究进展
1.3 Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制因子研究进展
1.4 g型溶菌酶研究进展
1.5 鞘脂蛋白研究进展
1.6 研究目的和意义
2 马氏珠母贝TLS蛋白酶基因与KuPI蛋白酶抑制剂的基因克隆与功能研究
2.1 实验材料
2.1.1 实验样本
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.1.4 实验主要溶液与试剂
2.2 实验方法
2.2.1 马氏珠母贝免疫效应分子筛选
2.2.2 PmTLS与 PmKuPI基因相关引物设计
2.2.3 总RNA提取
2.2.4 cDNA第一链的合成
2.2.5 中间片段克隆
2.2.6 3'和5'端RACE扩增
2.2.7 生物信息学分析
2.2.8 组织表达及PAMPs刺激后时序表达分析
2.2.9 重组蛋白制备
2.2.10 纯化蛋白抗菌活性检测
2.2.11 透射电镜观察纯化蛋白作用细菌后的形态变化
2.3 结果与分析
2.3.1 PmTLS与 PmKuPI的基因克隆
2.3.2 PmTLS与 PmKuPI理化性质分析
2.3.3 PmTLS与 PmKuPI同源性分析
2.3.4 PmTLS与 PmKuPI基因mRNA的组织定量分析
2.3.5 PAMPs刺激后PmTLS基因mRNA在血细胞的时序表达分析
2.3.6 PmTLS与 PmKuPI重组蛋白的表达
2.3.7 rPmTLS与 rPmKuPI的抗菌活性测定
2.3.8 rPmTLS与 rPmKuPI抗菌作用机制
2.4 讨论
2.4.1 PmTLS蛋白酶与PmKuPI蛋白酶抑制剂基因的分子特征
2.4.2 PmTLS蛋白酶与PmKuPI蛋白酶抑制剂基因mRNA差异分析
2.4.3 PmTLS蛋白酶与PmKuPI蛋白酶抑制剂的原核表达
2.4.4 rPmTLS的功能验证
2.4.5 rPmKuPI的功能验证
3 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B的基因克隆与功能研究
3.1 实验材料
3.1.1 实验样本
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验主要溶液与试剂
3.2 实验方法
3.2.1 马氏珠母贝免疫效应分子筛选
3.2.2 PmlysG与 PmSapB基因相关引物设计
3.2.3 基因克隆及生物信息学分析
3.2.4 组织差异性及PAMPs刺激后时序表达分析
3.2.5 重组蛋白制备
3.3 结果与分析
3.3.1 PmlysG与 PmSapB的基因克隆
3.3.2 PmlysG与 PmSapB理化性质分析
3.3.3 PmlysG与 PmSapB同源性分析
3.3.4 PmlysG与 PmSapB基因mRNA的组织表达分析
3.3.5 PAMPs刺激后PmlysG与 PmSapB基因mRNA在肝胰腺的时序表达分析
3.3.6 PmlysG与 PmSapB重组蛋白的表达
3.4 讨论
3.4.1 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B基因的分子特征
3.4.2 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B基因mRNA差异分析
3.4.3 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B的原核表达
4 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
本文编号：3988950
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 海洋无脊椎动物抗菌肽研究进展
1.2 胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶研究进展
1.3 Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制因子研究进展
1.4 g型溶菌酶研究进展
1.5 鞘脂蛋白研究进展
1.6 研究目的和意义
2 马氏珠母贝TLS蛋白酶基因与KuPI蛋白酶抑制剂的基因克隆与功能研究
2.1 实验材料
2.1.1 实验样本
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.1.4 实验主要溶液与试剂
2.2 实验方法
2.2.1 马氏珠母贝免疫效应分子筛选
2.2.2 PmTLS与 PmKuPI基因相关引物设计
2.2.3 总RNA提取
2.2.4 cDNA第一链的合成
2.2.5 中间片段克隆
2.2.6 3'和5'端RACE扩增
2.2.7 生物信息学分析
2.2.8 组织表达及PAMPs刺激后时序表达分析
2.2.9 重组蛋白制备
2.2.10 纯化蛋白抗菌活性检测
2.2.11 透射电镜观察纯化蛋白作用细菌后的形态变化
2.3 结果与分析
2.3.1 PmTLS与 PmKuPI的基因克隆
2.3.2 PmTLS与 PmKuPI理化性质分析
2.3.3 PmTLS与 PmKuPI同源性分析
2.3.4 PmTLS与 PmKuPI基因mRNA的组织定量分析
2.3.5 PAMPs刺激后PmTLS基因mRNA在血细胞的时序表达分析
2.3.6 PmTLS与 PmKuPI重组蛋白的表达
2.3.7 rPmTLS与 rPmKuPI的抗菌活性测定
2.3.8 rPmTLS与 rPmKuPI抗菌作用机制
2.4 讨论
2.4.1 PmTLS蛋白酶与PmKuPI蛋白酶抑制剂基因的分子特征
2.4.2 PmTLS蛋白酶与PmKuPI蛋白酶抑制剂基因mRNA差异分析
2.4.3 PmTLS蛋白酶与PmKuPI蛋白酶抑制剂的原核表达
2.4.4 rPmTLS的功能验证
2.4.5 rPmKuPI的功能验证
3 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B的基因克隆与功能研究
3.1 实验材料
3.1.1 实验样本
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验主要溶液与试剂
3.2 实验方法
3.2.1 马氏珠母贝免疫效应分子筛选
3.2.2 PmlysG与 PmSapB基因相关引物设计
3.2.3 基因克隆及生物信息学分析
3.2.4 组织差异性及PAMPs刺激后时序表达分析
3.2.5 重组蛋白制备
3.3 结果与分析
3.3.1 PmlysG与 PmSapB的基因克隆
3.3.2 PmlysG与 PmSapB理化性质分析
3.3.3 PmlysG与 PmSapB同源性分析
3.3.4 PmlysG与 PmSapB基因mRNA的组织表达分析
3.3.5 PAMPs刺激后PmlysG与 PmSapB基因mRNA在肝胰腺的时序表达分析
3.3.6 PmlysG与 PmSapB重组蛋白的表达
3.4 讨论
3.4.1 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B基因的分子特征
3.4.2 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B基因mRNA差异分析
3.4.3 马氏珠母贝g型溶菌酶与鞘脂蛋白Saposin-B的原核表达
4 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
本文编号：3988950
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