解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因的克

发布时间：2024-12-26 04:02

　　甲壳素在自然界中的含量极其丰富,是仅次于纤维素的第二大多聚物,壳聚糖可由甲壳素制备而得。壳聚糖降解产物在医学、农业、工业等多个行业中都有着很高的应用价值,比如,壳寡糖可以显著提高鱼类的免疫力,是优良的水产饲料添加剂。由于壳聚糖的分子量大,溶解度低,使得其直接应用往往具有较大的局限性。因此,探索对壳聚糖进行高效降解具有重要的理论和生产意义。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是广泛存在于自然界中的芽孢杆菌属的成员。利用以壳聚糖为唯一碳源的选择性培养基,我们筛选到一株可以高效降解壳聚糖的解淀粉芽孢杆菌,并开展其壳聚糖酶活性的研究,得到如下结果:1、根据细菌的形态、生理生化特征,并结合16SrDNA和gyrA基因,鉴定该细菌为解淀粉芽孢杆菌,并对该菌株进行命名为HZ-1510。2、克隆了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510的壳聚糖酶基因,通过生物信息学技术分析了该基因的结构,该壳聚糖酶基因开放读码框全长为837 bp,可以编码279个氨基酸,分子量大小为31.45 kDa。在其氨基末端具有信号肽,切割点位于第36位和37位氨基酸之间。氨基酸序列同源性分析结果显示该壳聚...

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【部分图文】：

图１－１不同类型壳聚糖酶的水解位点示意图??

壳聚糖酶作用于壳聚糖分子的还原性末端，专一性水解部分乙酰化的壳聚糖中??两个氨基葡糖残基之间的卩－１，４糖苷键产生壳寡糖。根据其水解位点的不同可分为三??类（如图１－１）。第Ｉ类壳聚糖酶能水解乙酰葡萄糖胺一氨基葡萄糖键（ＧｌｃＮＡｃ—ＧｌｃＮ）??和氨基葡萄糖一氨基葡萄糖键（Ｇｌ....

图２－１解淀粉芽孢杆菌Ｈ１１５１０的分离和细菌形态??１：壳聚糖选择性培养基中生长的细菌；２：?ＬＢ培养基中生长的细菌形态??

２．３．２菌株１６ＳｒＤＮＡ鉴定结果??用细菌１６Ｓ?ｒＤＮＡ通用引物对崗株进行ＰＣＲ扩增，然后用１％琼脂糖凝胶电泳??检测，结果如图２－２所示：在１０００?ｂｐ和２０００?ｂｐ?Ｍ?Ｗ?？糸约１４５０?ｂｐ的条带。??Ｉ?Ｍ??＿?２０００?ｂｐ??＜—１４４９?ｂｐ??＜—１....

图２－２细菌〗６Ｓ?ｒＤＩＮＡ基因电泳图??Ｍ：?ＤＬ－２０００?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?１６Ｓ?ｒＤＮＡ?ＰＣＲ?扩增产物??

１?２??图２－１解淀粉芽孢杆菌Ｈ１１５１０的分离和细菌形态??１：壳聚糖选择性培养基中生长的细菌；２：?ＬＢ培养基中生长的细菌形态??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｍｏｒｐｈｏＪｏｇｙ?ｏ＼?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ａｍｙｔｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ?....

图３－１壳聚糖酶基因编码序列的电泳图??

３．３．１壳聚糖酶基因的克隆结果??利用引物Ｃｈｉ－Ｆｌ和Ｃｈｉ－Ｒｌ克隆得到的壳聚糖酶基因编码序列，电泳检测结果??显示，有一条大小位于７５０?ｂｐ和ｌＯＯＯｂｐ之间的特异条带（图３－１），片段大小与预??期相符。??Ｍ?１??２０００?ｂｐ??１０００ｂｐ??８３７?ｂｐ??....

本文编号：4020500