野蚕丝素含RGD肽段的制备及其对细胞粘附、增殖性能的影响研究

发布时间：2022-07-07 15:32

　　丝素是蚕合成与分泌的天然蛋白质,包括家蚕丝素和野蚕（天蚕、柞蚕、栗蚕和大山蚕等）丝素。目前的研究主要集中在家蚕丝素的应用,研究发现,家蚕丝素不仅具有出色的机械性能和生物可降解性,并且其制备的材料能够很好的支持细胞的粘附、铺展、增殖,还有利于干细胞的分化等。然而对野蚕丝素（天蚕和柞蚕）的研究涉及略少。但是在天蚕丝素和柞蚕丝素分子中分布着高度重复的RGD序列,RGD短肽作为整合素与配体蛋白的相互作用的识别位点,使整合素与配体结合后,把胞外信号传入细胞内,激发细胞相应的功能。但并不是含RGD序列的肽段都具有促进细胞粘附生长等生物功能,所以明确野蚕丝素中含RGD的序列是否具有类似于细胞外基质中RGD的功能,这对于拓展野蚕丝素作为生物材料的应用至关重要。另外,有研究显示,RGD中任何一个氨基酸的取代将会影响其生物活性,所以揭示野蚕丝素含RGD肽段侧基基团的完整性是否对细胞有不同的作用,这也是至关重要的。因此,本文采用大肠杆菌表达了重组克隆的含RGD短肽基因的序列,对其侧基羧基进行保护与再释放,研究这段含有RGD短肽序列及其侧基羧基对细胞粘附增殖的影响。本文完成的主要工作有以下几个方面:（1）将本... 

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中文摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 野蚕丝素蛋白的结构与组成
        1.1.1 天蚕丝素蛋白的组成与结构
        1.1.2 柞蚕丝素蛋白的组成与结构
    1.2 野蚕丝蛋白的应用
    1.3 RGD三肽序列的功能及应用
    1.4 重组丝蛋白的研究
    1.5 本文主要研究目的及内容
第二章 野蚕丝素蛋白含RGD肽段的制备
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 主要试剂与缓冲液的制备
        2.2.4 实验方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 目的肽段表达载体p GEX-AY4的构建示意图
        2.3.2 目的肽段大量表达的流程图
        2.3.3 菌细胞总蛋白的SDS-PAGE图
        2.3.4 目的肽段的SDS-PAGE和质谱图
    2.4 本章小结
第三章 目的肽段（-RGD-）_4羧基保护/脱保护及其鉴定
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 主要试剂的配制
        3.2.4 实验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 目的肽段（-RGD-）_4侧基羧基保护前后鉴定
        3.3.2 接枝后丝素蛋白膜的鉴定
        3.3.3 丝素蛋白膜上（-RGD-）_4接枝能力分析
        3.3.4 肽段（-RGD-）_4在丝素蛋白膜上的分布
    3.4 本章小结
第四章 目的肽段（-RGD-）_4对细胞粘附与增殖的影响
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 主要试剂的配制
        4.2.4 实验方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 细胞粘附率分析
        4.3.2 细胞增殖分析
    4.4 本章小结
第五章 结语
    5.1 全文结论
    5.2 全文的主要研究成果
    5.3 本文的不足及今后的研究计划
参考文献
攻读学位期间本人公开发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰多孔钽对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能的促进作用[J]. 甘洪全,王茜,张辉,赵宏坤,王辉,宋会平,毕成,王志强,李琪佳.  吉林大学学报(医学版). 2015(03)
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硕士论文
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[2]RGD肽型阳离子类脂的合成及基因转运性能研究[D]. 刘天龙.辽宁师范大学 2015
[3]野蚕丝素含RGD肽段的制备及其细胞粘附、增殖性能的研究[D]. 赵焕荣.苏州大学 2015
[4]丝素蛋白管状支架制备及其水蛭素改性研究[D]. 魏雅丽.苏州大学 2014
[5]重组野蚕丝素含RGD肽段的制备与表征[D]. 杨云星.苏州大学 2013
[6]再生丝素蛋白结构转变的研究[D]. 熊思勇.苏州大学 2010



本文编号：3656689