红汁乳菇多酚物质提取纯化及其抗癌活性的研究

发布时间：2020-06-01 11:04

【摘要】：红汁乳菇(Lactarius hatsudake Tanaka)是世界著名的美味野生食用菌,红汁乳菇分布于安徽、吉林、辽宁、江苏、福建、广东、广西、四川、云南、贵州、西藏等地,夏秋生于松林中地上,该菌味道鲜美,可加工成菌油,或经速冻后长期保,具有巨大的规模开发的市场前景。本文采用红汁乳菇作为原材料,探讨了红汁乳菇多酚类化合物的超声波辅助提取的工艺,并对其进行了优化。并通过体外试验研究了红汁乳菇多酚的抗癌活性。在红汁乳菇的超声波辅助提取的工艺优化中,以总酚含量为响应值,选择溶剂类型、溶剂浓度、料液比、超声时间、提取次数等因素进行响应面优化,得到拟合方程 Y = 4.83 + 0.13*A+ 0.30*B-0.037*C-0.089*A*B + 0.037*A*C-0.11*B*C-0.54*A2-0.16*B2-0.20*C2(A、B、C分别是时间、料液比及浸提液浓度),试验中这三个因素对提取多酚的显著性影响大小分别是料液比提取时间浸提液浓度。通过对方程的求解,对方程进行预测,并结合实验的参数设定要求,得到红汁乳菇超声波辅助提取的最佳工艺条件:提取时间80 min、乙醇浓度56%、料液比1:25(g/mL)、提取2次,在该条件下总酚得率为5.05mg/g。采用该工艺条件进行提取,其实验结果与优化结果误差为1.05%。初步提取后的多酚物质经过AB-8大孔树脂纯化后,其多酚含量能达到139.46±5.42 mg/g,较粗体物有了较大的提升。纯化后的红汁乳菇多酚物质通过分析型高效液进行测定,高效液相分析条件为流速:1ml/min,溶剂为A液:0.1%甲酸、B液:乙腈,在梯度条件为0-2 min,8-10%乙腈;2-10 min,10-20%乙腈;10-30 min,20-80%乙腈;30-31 min,80-100%乙腈;31-40 min,100%乙腈;40-43 min,100-8%乙腈下进行梯度洗脱,得到红汁乳菇中多酚成分主要有:绿原酸、阿魏酸、没食子酸、连苯三酚、肉桂酸、杨梅素、对羟基苯甲酸、尿黑酸和其它7种未知物质。纯化处理后的红汁乳菇多酚的体外抗癌实验显示,红汁乳菇多酚在较低的浓度时就能有非常理想的结直肠癌细胞HCT116抑制活性。多酚化合物能够抑制结直肠癌细胞的增殖,通过实验推测其抑制机理为:红汁乳菇多酚纯化物→MAPK信号通路受阻→AP-1和NFκB活性受到抑制→cyclin D1表达降低、CDKI表达提高→细胞周期受到抑制→HCT116细胞的增殖受阻;多酚化合物也能促进结直肠癌细胞的细胞凋亡,通过实验推测其抑制机理为:红汁乳菇多酚纯化物-→Bcl-2表达降低、Bax表达提高,Bcl-2/Bax比值减小→Caspase-3活化-→HCT116细胞凋亡。
【图文】：

技术路线图,红汁乳菇,多酚物质,林业科技

图１．２技术路线图逡逑Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ邋ｒｏａｄｍａｐ逡逑

标准曲线,没食子酸,标准曲线,红汁乳菇

ＡＡＡＣＧＧＧＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＧＧＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＧＧＣＧＣＡＡＧＧＴＧＣ。将ＩＴＳ序列与美国国立生物技术信息中心（Ｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｅｎｔｅｒ邋ｆｏｒ邋Ｂｉｏｔｅｃｎｏａｔｉｏｎ）进行比对后，验证其为红汁乳燕。逡逑２红汁乳菇的处理逡逑购买的新鲜的红汁乳菇去除污泥后立即放入冰柜，，使其中的自由水在，将冻住的红汁乳进行冻干处理，冻干两天后取出备用，用粉碎机粉碎目筛网筛取对应孔径红汁乳菇粉末。逡逑３总酚含量测定逡逑汁乳菇中总酚测定采用Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法以没食子酸作为对子酸按一定的浓度配制备，与Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ显色剂２ｈ后，在７６０ｎ测定其吸光值，按含量和吸光度作出曲线，其回归方程为ｙ邋＝邋０．０１４６７７，邋Ｒ２邋＝０．９９９７。用该曲线的方程便可以计算出总酚的含量。逡逑０邋８邋－逡逑
【学位授予单位】：中南林业科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R73-3;TS201.2

【参考文献】