基于球形纳米金和金纳米花标记的免疫层析法检测三种霉菌毒素

发布时间：2020-06-15 09:06

【摘要】：本文应用柠檬酸钠还原法和金种子生长法分别制备了球形纳米金(gold nanospheres,AuNSs)和金纳米花(gold nanoflowers,AuNFs)颗粒,结合本实验室制备的抗原和抗体,建立了基于球形纳米金标记抗原的免疫层析法检测呕吐毒素;建立了基于金纳米花标记的免疫层析法检测玉米赤霉烯酮;并建立了基于金纳米花标记的免疫层析法高灵敏定量检测黄曲霉毒素M_1。1.基于球形纳米金标记抗原的免疫层析法检测呕吐毒素用球形纳米金标记抗原的方法制备了用于检测粮食和饲料中呕吐毒素的纳米金免疫层析检测卡(deoxynivalenol gold nanosphere immunochromatographic test card,DON-GICT),经过系统的参数优化研究,DON-GICT检测DON标准品灵敏度达到50ng/mL,检测时间为10min左右,对实际样品的检测限为1000μg/kg且有较好的抗基质干扰效果。检测34份粮食和饲料样品,7份样品显示阳性,其余样品显示为阴性,与商业化DON-ELISA检测结果相比,总符合率为94.1%。2.金纳米花的制备及免疫层析法检测玉米赤霉烯酮以透射电镜等手段为表征,通过正交试验法优化,制备了粒径为(116.7±2.0)nm、分支多的1#金纳米花,并进一步优化了金纳米花标记玉米赤霉烯酮单克隆抗体的条件,建立了检测粮食和饲料中的玉米赤霉烯酮的免疫层析法(zearalenone gold nanoflower immunochromatographic test card,ZEN-GFICT)。检测结果显示:ZEN-GFICT在采用对比法和消线法判断结果时,检测灵敏度分别为0.5和6ng/mL,是传统ZEN纳米金免疫层析检测卡的6倍(对比法)和4.5倍(消线法)。21份样品的ZEN-GFICT判断结果(对比法和消线法)与ELISA试剂盒检测结果相比,总符合率均为90.5%。3.基于金纳米花标记的免疫层析法高灵敏定量检测黄曲霉毒素M_1建立了用非线性四参数拟合曲线定量检测牛奶中黄曲霉毒素M_1的金纳米花免疫层析法(aflatoxin M_1 gold nanoflower immunochromatographic test card AFM1-GFICT),研究了pH、缓冲液种类、离子强度和表面活性剂对免疫层析反应的影响,确定了AFM_1定量免疫层析检测卡读取信号值的时间段为20-25min。AFM_1检测范围为20-1000pg/mL,非线性四参数拟合曲线相关系数R~2=0.9993,最低检测限为12.3 pg/mL。检测在空白牛奶样品加入AFM_1标准品浓度为0.1,0.3和0.5μg/kg的回收率为80.4%-118.2%,变异系数(n=10)为4.27%-9.43%。15份牛奶样品的AFM_1-GFICT和商业化AFM_1-ELISA检测结果相比,线性拟合相关系数R~2=0.9768。
【学位授予单位】：江西科技师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O652;TS207.3;TB383.1
【图文】：

第 1 章 绪论概述腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）本结构和理化性质刀菌烯醇是一种单端孢霉素，主要由禾谷镰刀红镰刀菌(Fusarium roseum)产生[9]， 猪食用此物呕吐毒素（vomitoxin）。1972 年，Morooka 等从shizawa 等解析了这种物质的结构，并将其命名为相对分子质量为 296.32。其纯品为白色针状结晶和极性溶剂，如甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙耐酸性。其化学结构如图 1-1。

图 1-3 AFB1（左）和 AFM1（右）化学结构式Figure 1-3 AFB1(left) and AFM1(right) chemical structuresAFM1的毒性危害和国家限量标准M1具有剧毒性和强致癌性[31]，世界卫生组织国际癌症研究机构M1列为Ⅰ类致癌物[32]。AFM1在肝脏中代谢后产生一种环氧化中 RNA 的合成及 DNA 的转录，阻止和影响蛋白质、脂肪、谢，这就导致肝细胞的突变及坏死。其对肝组织具有强烈地破牛奶及其制品中 AFM1制定了限量标准，见表 1-3，其中欧盟对牛奶中 AFM1限量标准较严格，而埃及和罗马尼亚则规定不表 1-3 国内外牛奶及其制品中 AFM1限量标准Table 1-3 AFM1limit standards for milk and its products at home and abr国家 乳品类型 限量值(μg尼日利亚 牛奶 1美国 乳及乳制品 0.5

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本文编号：2714196