条斑紫菜多糖的降解、分离纯化及生物活性研究
发布时间：2020-06-24 20:12
【摘要】：条斑紫菜是一种分布在江苏沿海地区的经济型褐藻,含有蛋白质、多糖、维生素和矿物质等营养成分。研究表明条斑紫菜多糖具有抗炎症、降血脂、抗肿瘤、提高免疫力、抗氧化等多种生物活性。本论文旨在为研发具有良好抗氧化、降血脂、提高免疫力活性的条斑紫菜多糖相关功能性食品提供理论依据。多糖的生物活性常与其空间结构和分子量有关,为了提高其生物活性,本文以条斑紫菜为原料采用水提醇沉法提取条斑紫菜粗多糖,用过氧化氢和抗坏血酸联合的方法对条斑紫菜粗多糖进行降解,对降解多糖进行分离纯化后再对纯化的组分进行化学成分分析、结构分析、体外免疫活性和体外抗氧化活性研究。主要研究结果如下:1.用水提醇沉法从条斑紫菜中提取条斑紫菜多糖(PSPY),提取率为9.7%。用过氧化氢-抗坏血酸联合的方法对条斑紫菜多糖进行降解,经单因素实验和响应面优化,得出最优的降解条件:降解剂浓度为4.1 mM、降解温度为52.4℃、降解时间为2.1 h,降解多糖(DPSPY)的得率为73.89%。2.对PSPY和DPSPY进行化学成分分析,发现降解后多糖的总糖含量和硫酸基含量提高,蛋白质含量降低,高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测得降解前后多糖的峰位分子量分别为4.52×105和1.70×104。经红外光谱扫描分析后发现降解前后多糖的结构没有发生明显的改变。通过对PSPY和DPSPY的还原力、DPPH自由基的清除活性、·OH自由基的清除活性和O2-自由基的清除活性的研究发现,DPSPY的还原力和三种自由基的清除活性显著高于PSPY。以考来烯胺为阳性对照,纤维素为阴性对照,发现DPSPY对胆汁酸的结合能力强于PSPY。3.DPSPY 经 DEAE Cellulose-52 和 SephadexG-100 进行分离纯化后得到 DPSPY-0、DPSPY-0.1M、DPSPY-0.3M 和 DPSPY-0.5M 四个组分,DPSPY-0、DPSPY-0.1M、DPSPY-0.3M 和 DPSPY-0.5M 的相对分子量分别为 1.08×104、1.07×104、1.87×104 和 3.55×104,总糖含量分别为 75.86%、78.40%、78.54%、79.20%,蛋白质含量为 0.72%、未检测出、0.24%和未检测出,硫酸基含量为4.9%、16.93%、17.10%和17.76%。GC-MS分析发现各组分都主要是半乳糖组成,并含有少量的葡萄糖、甘露糖、木糖和鼠李糖组成。紫外-可见光全波段扫描可知DPSPY-0和DPSPY-0.3M含有少量的糖蛋白基本不含核酸及色素。DPSPY-0.1M和DPSPY-0.5M基本不含核酸、蛋白质及色素。红外光谱分析四种分离纯化组分均具有多糖的特征吸收峰,均为吡喃糖。核磁共振光谱分析可知条斑紫菜降解多糖的四个分离纯化组分均为同时存在α-型和β-型糖苷键的吡喃糖。4.利用细胞模型实验比较了 PSPY、DPSPY、DPSPY-0、DPSPY-0.1M、DPSPY-0.3M 和 DPSPY-0.5M 的体外免疫活性。结果表明条斑紫菜多糖、降解多糖及其分离纯化组分都具有一定的促进RAW264.7巨噬细胞增殖的作用,都具有增强RAW264.7巨噬细胞吞噬中兴红的能力,DPSPY和DPSPY-0.5M具有促进RAW264.7巨噬细胞分泌细胞因子NO的能力。5.铁还原力和自由基(DPPH、·OH、O2-)清除实验结果表明,四个纯化组分中DPSPY-0的抗氧化活性最小,DPSPY-0.5M的抗氧化活性最强。各纯化组分的抗氧化活性强弱顺序与其硫酸基含量高低顺序基本一致。
【学位授予单位】：浙江工商大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS254.58
【图文】：
浙江工商大学硕士学位论文逡逑由图２－１可以看出，在测量范围内（０？１０ｍＭ）内，在Ｈ２０２－Ｖｃ的浓度０－４逡逑ｍＭ范围内降解多糖对ＤＰＰＨ自由基的清除率随降解剂浓度的升高而不断升高，逡逑从４邋ｍＭ以后随着降解剂浓度的增加，降解后的多糖对ＤＰＰＨ的清除率不断下降，逡逑这可能是由于Ｈ２０２－Ｖｃ的浓度增大会增加对多糖分子链的作用，当降解剂浓度逡逑超过４ｍＭ时降解程度增大，使大分子多糖降解为较小的碎片，而当分子减小到逡逑一定程度会降低其对ＤＰＰＨ自由基清除活性。因此Ｈ２０２－Ｖｃ的浓度选用４邋ｍＭ逡逑时进行以下两项单因素实验。逡逑２．３．１．２反应温度的影响逡逑５２邋－逡逑：：逡逑v溴危巍㈠义希椋簦妫妫殄义希颍澹澹义
本文编号：2728299
【学位授予单位】：浙江工商大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS254.58
【图文】：
浙江工商大学硕士学位论文逡逑由图２－１可以看出，在测量范围内（０？１０ｍＭ）内，在Ｈ２０２－Ｖｃ的浓度０－４逡逑ｍＭ范围内降解多糖对ＤＰＰＨ自由基的清除率随降解剂浓度的升高而不断升高，逡逑从４邋ｍＭ以后随着降解剂浓度的增加，降解后的多糖对ＤＰＰＨ的清除率不断下降，逡逑这可能是由于Ｈ２０２－Ｖｃ的浓度增大会增加对多糖分子链的作用，当降解剂浓度逡逑超过４ｍＭ时降解程度增大，使大分子多糖降解为较小的碎片，而当分子减小到逡逑一定程度会降低其对ＤＰＰＨ自由基清除活性。因此Ｈ２０２－Ｖｃ的浓度选用４邋ｍＭ逡逑时进行以下两项单因素实验。逡逑２．３．１．２反应温度的影响逡逑５２邋－逡逑：：逡逑v溴危巍㈠义希椋簦妫妫殄义希颍澹澹义
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