福建水仙茶两种黄酮糖苷的分离鉴定及其抑制口腔致病菌功能的研究

发布时间：2020-06-23 16:46

【摘要】：福建水仙茶畅销于闽西、广东及东南亚国家和地区,具有健齿提神、助消化、降胆固醇等功能。福建水仙茶含多种活性成分,主要为黄酮类化合物。本文以福建水仙茶为原料,分离了两种新型黄酮糖苷化合物并进行鉴定;比较了两种化合物在不同产地、不同季节水仙茶中的含量差异;并研究两种化合物对口腔致病菌的抑制作用及机制,研究结果可为寻找天然抗菌剂提供依据。主要研究结果如下:1、采用AB-8型大孔树脂进行分离纯化,乙醇梯度洗脱,流速1.5 BV/h,收集80%乙醇洗脱部分,旋干后得到半制备样品;半制备液相色谱分离条件为:0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈流动相梯度洗脱,一次上样量100 mg,流速10 mL/min,二次制备后两种黄酮糖苷纯度分别达到98.77%和97.08%,命名为F1和F2;利用质谱和核磁共振波谱等现代技术手段进行结构鉴定,F1和F2分别是Quercetin3-O-[(E)-p-coumaroyl-(1→2)][α-L-arabinopyranosyl-(1→3)][β-D-glucopyr anosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-D-glucopyranoside)和 Kaempferol 3-O-[(E)-p-coumaroyl-(1→2)][α-L-arabinopyranosyl-(1→3)][β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1 →6)]-β-D-glucopyranoside。2、通过建立用于分析福建水仙茶中黄酮类化合物的UPLC方法对不同产地、不同季节的水仙茶中的F1 和F2进行含量测定,结果表明,建瓯、武夷、漳平、闽南四个产地的水仙茶中建瓯水仙的F1含量最高,为1.3 mg/g,武夷水仙的F2含量最高,为0.85 mg/g;四个产地的水仙茶中的F1含量均高于F2;福建水仙茶中的F1含量随着生长时期呈升高趋势,在露季(初冬)达到最高,为1.25 mg/g,F2在一年四季内的含量在0.5 mg/g上下波动。3、通过微量二倍稀释法测定了 F1和F2对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的抑制作用,最低抑菌浓度在0.12-0.24 mM范围内,显示两者对口腔致病菌均具有较强的抑制效果;用结晶紫染色法评估了 F1和F2对致病菌生物膜的抑制能力,结果表明两者均剂量依赖性地减少细菌生物膜的形成,高浓度(0.24mM)作用下的生物膜被抑制70%;通过计算F1和F2的铁螯合率,发现两者在0.0075-0.06 mM范围内均具有较强的铁载体活性,浓度在0.06 mM时铁螯合率大于50%。结果表明F,和F2可以通过抑制细菌生长和生物膜形成及螯合铁离子等途径减少口腔疾病的发生。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS272.55
【图文】：

外形图,水仙,茶树,外形图

１．１．１水仙茶树形态特征及生物特性逡逑福建水仙茶为无性繁殖系品种，属小乔木型，原产于建阳县水吉的大湖，并逡逑逐步被外地引植。图１．１为福建水仙外形图，水仙茶树树势高大，主干明显，分逡逑技稀，叶片呈水平状着生，叶片大而厚，色浓绿，叶柄粗扁，梗粗，节间长，芽逡逑叶含水量高。该品种育芽力和持嫩性较强，一芽三叶盛期在４月下旬，萌芽开采逡逑期较迟；抗逆性较强，扦插繁殖发根率较高，根系发徸，吸肥力强，植株经济寿逡逑命长。多年来，生产者评价水仙品种好栽、好采、好制、适制性广，茶产量高，逡逑平均可生产鸟龙茶１５０ｋｇ／６６７邋ｍ２以上，且树龄长。与其他乌龙茶品种相比，水仙逡逑的香气物质成分包括橙花叔醇，香叶醇、苯甲酸、３－已烯酯、醇－茉莉酮和Ｐ－紫罗逡逑兰酮等含量均偏高。水仙的碳、氮代谢适中，双糖、单糖含量较高。酯型儿茶素逡逑和非酯型儿茶素比值低

洗脱液,大孔树脂,目标化合物,峰面积

逦第二章两种黄酮苷的分离纯化及结构鉴定逡逑并进行ＵＰＬＣ检测（图２．４），经浓缩干燥后得到洗脱产物９０２．６邋ｍｇ。逡逑６．０ｎ逦ｐ逡逑ｒ邋ＡＴ逡逑０．０Ｊ￣￣ｆ逦￥逦ｆ逦逦１逦１逦１逦１逦１逦—逡逑１逦２逦３逦４逦５逦６逦７逦８逦９逦１０逦１１逡逑图２．３大孔树脂洗脱液中所含目标化合物Ｆ，、？２的峰面积逡逑Ｆｉｇ．２．３邋Ｐｅａｋ邋ａｒｅａｓ邋ｏｆ邋ｔａｒｇｅｔ邋ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ邋ｉｎ邋ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ邋ｒｅｓｉｎ邋ｅｌｕｅｎｔ逡逑注：１邋（６０％洗脱液第１管）；２邋（６０％洗脱液第６管）；３邋（６０％洗脱液第１１管）：４邋（６０％逡逑洗脱液第１６管）；５邋（６０％洗脱液第２１管）；６邋（８０％洗脱液第１管）；７邋（８０％洗睨液第６逡逑管）；８邋（８０°／。洗脱液第１１管）；９邋（８０％洗脱液第１６管）；１０邋（８０％洗脱液第２１管）；１１逡逑（８０％洗脱液第２６管）逡逑Ｆ，逡逑ｉ逡逑二逦Ｉ逡逑二逦Ｉ逦（逡逑二逦！逦Ｆ逡逑１邋ｈ邋丨邋ｉ．逡逑：逦？ｆｌ邋！邋ｉ逦ｆ邋ｆｉ逡逑

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